Evaluation of different Campylobacter jejuni isolates to colonize the intestinal tract of commercial turkey poults and selective media for enumeration
不同空肠弯曲菌菌株对商品火鸡雏肠道定植能力及计数选择性培养基评价
来源：Poultry Science, Volume 97, Pages 1689–1698, Published 2018
《家禽科学》，2018年，第97卷，页码1689-1698
摘要
空肠弯曲菌是人食源性肠炎首要致病菌，家禽产品是重要感染来源。本研究选用人源NCTC11168、火鸡源NADC20827两株空肠弯曲菌，口服感染三周龄商品火鸡雏，分别在3、7、21 d采集回肠、结肠、盲肠内容物，采用CLA-S、CAC、Campy Cefex三种选择性培养基分离计数，并经多重PCR与qPCR鉴定菌株。结果显示两菌株在回肠仅短暂定植，盲肠可长期稳定定植至21 d；CLA-S与CAC计数结果无显著差异，Campy Cefex因杂菌过度生长无法用于火鸡肠道样本定量。该研究明确火鸡盲肠是空肠弯曲菌主要定植位点，筛选出两种适用计数培养基，为宰前减菌和食品安全防控提供试验依据。
关键词
空肠弯曲菌；火鸡雏；肠道定植；选择性培养基；活菌计数；PCR鉴定；食源致病菌
研究目的
对比人源与火鸡源空肠弯曲菌在火鸡雏不同肠道区段的定植规律，筛选适用于火鸡肠道弯曲菌定量的选择性培养基，完善该菌在家禽体内定植基础数据，支撑家禽源头减菌与食品安全管控。
研究思路
1. 多株空肠弯曲菌体外培养，采用Bioscreen测定生长曲线，筛选NCTC11168、NADC20827作为攻毒菌株。
2. 试验火鸡雏分三组，分别空白对照、NCTC11168攻毒、NADC20827攻毒，饲养至3、7、21日剖杀取样。
3. 取回肠、结肠、盲肠内容物，分别用CLA-S、CAC、Campy Cefex平板稀释涂布计数。
4. 挑取菌落利用多重PCR、qPCR进行菌种分子鉴定，验证计数准确性。
5. 统计各时间点、各肠段载菌量，对比菌株定植差异与三种培养基分离效果。
研究亮点
1. 明确火鸡回肠仅短暂带菌，盲肠是空肠弯曲长期稳定定植靶器官，填补火鸡定植数据空白。
2. 首次证实CAC显色琼脂可用于火鸡肠道空肠弯曲菌定量，与CLA-S效果相当。
3. 证实体外生长性能不能预判菌株家禽体内定植能力，火鸡来源菌株体外长势弱但盲定植稳定性更优。
4. 淘汰Campy Cefex培养基，为行业火鸡弯曲菌检测选用培养基提供直接参考。
可延伸的方向
1. 探究饲料添加剂、益生菌降低火鸡体内空肠弯曲菌定植效果。
2. 探究不同饲养环境对家禽弯曲菌携带率的影响。
3. 优化家禽屠宰环节减菌工艺，降低终端产品污染。
4. 解析两株菌株定植差异相关基因与分子机制。
5. 拓展不同品种鸡鸭体内定植对比试验。
测量的数据及研究意义
1 各菌株体外生长动力学数据（图1），筛选试验攻毒菌株，确定菌液制备条件，为动物攻毒接种浓度设定提供依据。
2 不同肠段、不同日龄活菌计数数据（图2、3、4，表1），明确回肠一过性定植、盲肠持久定植的分布特征，阐明菌株定植差异性。
3 三种培养基计数对比数据，证实CLA-S、CAC适配火鸡样本，Campy Cefex杂菌超标不适用，优化检测方案。
4 多重PCR与qPCR验证数据（表2），确认平板长出菌落为空肠弯曲，保障计数结果真实可靠。
结论
1 NCTC11168和NADC20827在火鸡回肠定植随饲养时间显著下降，结肠NADC20827后期载菌明显降低，盲肠均可稳定定植21天。
2 CLA-S与CAC两种选择性培养基均可用于火鸡肠道空肠弯曲菌精准计数，Campy Cefex受杂菌干扰无法定量。
3 菌株体外生长优劣不能反映家禽体内定植能力，火鸡源菌株体外生长差但盲肠定植稳定性更佳。
4 本研究定植与培养基数据可用于后续家禽体内抑菌试验与家禽源头食品安全防控研究。
使用芬兰 Bioscreen仪器测量数据的研究意义
利用芬兰Bioscreen微孔培养系统定时测定OD600，高通量同步测定多株空肠弯曲菌全周期生长变化，精准对比各菌株生长速率与终菌体密度，快速筛选目标攻毒菌株，标准化体外培养条件，减少人工试验误差，统一接种用菌的制备标准，保证动物攻毒试验初始菌量一致性，是体内定植试验前期关键质控手段。