Assessing the Survival of Listeria monocytogenes in a Domestic Freezer by Analyzing Subsequent Growth at 30°C Using a Novel Reference Method
采用新型参考方法通过分析30℃下的后续生长评估单核细胞增生李斯特菌在家用冰箱中的存活情况
来源：Journal of Food Protection, 2015, 78(2):349-354, doi:10.4315/0362-028X.JFP-14-319
《食品保护杂志》，2015年，第78卷，第2期，页码349-354，doi:10.4315/0362-028X.JFP-14-319
摘要
本研究建立一种新方法评估单核细胞增生李斯特菌在-22℃家用冰箱中不同时长冷冻储存后的存活状态，通过对比实验组与对照组在30℃下的生长检测时间，分析冷冻对细菌迟滞期、生长速率及损伤的影响。结果显示，李斯特菌在常规TSB及3%盐度TSB中冷冻储存长达6个月仍可存活，仅表现为迟滞期小幅延长、数据变异略有增加；3%盐度会轻微加剧迟滞期延长，储存6个月后约50%菌体失活。该方法可简便评估冷冻环境对致病菌的影响，为食品风险评估提供新手段。
关键词
单核细胞增生李斯特菌；家用冷冻；存活；迟滞期；检测时间；食品安全；冷冻损伤；生长动力学
研究目的
建立新型参考方法评估单核细胞增生李斯特菌在-22℃家用冰箱中不同储存时长后的存活与损伤情况，明确冷冻及盐度对细菌复苏生长的影响。
研究思路
1. 制备多块含系列稀释菌液的相同微孔板，一块立即作为对照，其余在-22℃冷冻储存不同时间。
2. 使用Bioscreen C分析仪测定对照组与冷冻组在30℃下的OD600变化，计算检测时间。
3. 拟合Baranyi‑Robert模型，比较不同储存时间的迟滞期、比生长速率与变异度。
4. 分析常规TSB与3%盐度TSB对冷冻后细菌生长的影响。
5. 基于检测时间差异评估冷冻造成的菌体损伤与失活程度。
研究亮点
1. 首创同步对照微孔板法，精准评估冷冻对致病菌存活与损伤的影响，操作简便、可重复性高。
2. 证实李斯特菌在-22℃家用冰箱中极具耐受性，储存6个月仍保持高存活。
3. 量化冷冻仅延长迟滞期，不显著降低生长速率，揭示冷冻后快速复苏风险。
4. 证明3%盐度轻微加剧冷冻损伤，但整体不改变强存活特性。
5. 模型化检测时间差异，可推广至pH、水分活度、防腐剂等多因素研究。
可延伸的方向
1. 将方法应用于真实食品基质（肉类、乳制品、即食食品）中李斯特菌冷冻存活评估。
2. 拓展至其他食源性致病菌（沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等）的冷冻耐受性研究。
3. 探究不同冷冻速率、解冻方式对菌体损伤与复苏的影响。
4. 结合防腐剂、低温屏障等因子评估复合 hurdles 对冷冻致病菌的控制效果。
5. 建立基于检测时间的快速无损活菌损伤与存活预测模型。
测量的数据及研究意义
1. 检测时间TTD数据（图1、图2）：对照组与冷冻组达到OD=0.2的时间，直接反映冷冻导致的迟滞期延长，体现菌体损伤程度。
2. 生长动力学参数（表1）：比生长速率、迟滞期、检测阈值，量化冷冻储存时间与盐度对生长的影响，证明迟滞期随储存时间延长而增加。
3. 检测时间差值ΔTTD数据（图3、图4）：实验组与对照组的时间差，拟合对数正态分布，客观表征菌体损伤的分布特征。
4. 初始OD值数据：冷冻6个月后高盐组初始OD小幅下降，对应约50%失活，证明长期高盐冷冻有轻微致死作用。
5. 模拟拟合数据（图5、表2）：基于对数正态分布的模拟值与实测值高度吻合，验证模型可靠性。
结论
1. 单核细胞增生李斯特菌在-22℃家用冷冻环境中存活能力极强，储存6个月后仍可快速复苏。
2. 冷冻主要导致细菌迟滞期延长，对最大比生长速率无显著抑制作用。
3. 3%盐度会轻微加剧冷冻损伤，使迟滞期延长略多，长期储存可造成约50%失活。
4. 本研究建立的同步对照微孔板法可高效、精准评估冷冻对食源性致病菌的存活影响。
5. 研究结果提示冷冻食品需在冰箱内缓慢解冻，以降低李斯特菌复苏生长风险。
使用芬兰Bioscreen仪器测量数据的研究意义
使用芬兰Bioscreen C全自动生长分析仪，在30℃下连续48小时、每10分钟读取OD600数值，高通量平行测定对照组与冷冻组微孔板的生长曲线。该仪器提供高精度、高重复性的吸光度监测，精准计算达到OD=0.2的检测时间，为迟滞期、生长速率拟合及菌体损伤评估提供标准化定量数据。同时消除人工操作误差，确保对照组与实验组数据可比，是本研究创新方法与核心结论的关键技术支撑。