全自动生长曲线分析仪

Abf1 participates in the response to DNA damage and replicative stress in Candida glabrata (Nakaseomyces glabratus)

Abf1 参与光滑念珠菌（Nakaseomyces glabratus）的 DNA 损伤与复制胁迫响应

来源：Fungal Genetics and Biology 181 (2025) 104041

论文整体总结

该论文发表于 2025 年《Fungal Genetics and Biology》期刊，聚焦机会性致病真菌光滑念珠菌的 ARS 结合因子 1（CgAbf1），解析了其在 DNA 损伤与复制胁迫响应中的全新功能。CgAbf1 是光滑念珠菌的必需蛋白，既往研究已证实其参与亚端粒沉默、黏附素基因调控与细胞周期进程，而其同源蛋白 ScAbf1 在酿酒酵母中参与核苷酸切除修复与 DNA 损伤响应，但其在光滑念珠菌中的胁迫响应功能尚未明确。

本研究通过生物信息学分析、分子遗传学、细胞生物学与生化实验，证实 CgAbf1 定位于细胞核并可形成同源二聚体，且该二聚化不依赖于其 C 端 43 个氨基酸（CS2 结构域核心区域）；CgAbf1 通过直接结合自身启动子实现转录负调控，以此维持胞内蛋白水平稳态，该自调控同样不依赖于 C 端 43 个氨基酸。研究发现，CgAbf1 是光滑念珠菌应对紫外（UV）光诱导 DNA 损伤的关键因子，其 C 端 43 个氨基酸是该功能的核心区域，截短该区域会导致菌株对 UV 损伤高度敏感；而 CgAbf1 过表达会造成严重的细胞毒性，同时使菌株对 UV 损伤、羟基脲（HU）诱导的复制胁迫、甲磺酸甲酯（MMS）损伤均表现出超敏表型。此外，CgAbf1 在复制胁迫与 UV 损伤下存在差异化的翻译后调控模式，且酿酒酵母 ScAbf1 可完全回补光滑念珠菌 abf1Δ 菌株的致死表型。该研究首次揭示了 CgAbf1 在 DNA 损伤与复制胁迫响应中的核心功能，完善了光滑念珠菌胁迫响应调控网络，也为该病原菌的毒力调控与抗真菌靶点开发提供了全新的理论依据。

1. 论文摘要内容

ARS 结合因子 1（Abf1）是多种真菌中均存在的 DNA 结合蛋白。在机会性致病真菌光滑念珠菌（Nakaseomyces glabratus）中，Abf1（CgAbf1）由 ABF1 基因编码。本研究证实，CgAbf1 对光滑念珠菌的生存能力至关重要，且参与多个 EPA 基因的亚端粒沉默 —— 这些基因编码介导上皮细胞黏附的黏附素，凸显了其作为该病原菌毒力因子的重要性。既往研究发现，CgAbf1 的表达缺失与过表达均会导致生长缺陷，并诱导细胞周期进程延迟。本研究旨在明确 CgAbf1 是否参与复制胁迫与 DNA 损伤胁迫的响应。我们分析了上述胁迫条件下 CgAbf1 的蛋白水平，以及 CgABF1 启动子的活性，发现 CgAbf1 对自身转录存在负调控作用。双分子荧光互补实验显示，CgAbf1 定位于细胞核并可形成同源二聚体。我们还发现，CgAbf1 参与 UV 光诱导 DNA 损伤后的细胞存活，同时证实酿酒酵母 Abf1（ScAbf1）可回补光滑念珠菌 abf1Δ 菌株的致死表型。

2. 论文关键词

复制胁迫、紫外光诱导的 DNA 损伤、Abf1–43、DNA 损伤响应、光滑念珠菌、Abf1、同源二聚体、转录自调控、异源功能回补

3. 研究目的

明确 CgAbf1 是否参与光滑念珠菌的复制胁迫与 DNA 损伤胁迫响应，解析其在该生物学过程中的具体功能与作用机制。

探究 CgAbf1 的自身转录调控模式、同源二聚化特性与亚细胞定位，明确其核心功能结构域，尤其是 C 端 43 个氨基酸（CS2 结构域核心区域）的生物学作用。

解析 DNA 损伤与复制胁迫条件下，CgAbf1 的转录水平与翻译后调控变化，明确其响应不同胁迫的分子调控模式。

验证 CgAbf1 的表达剂量（缺失 / 截短 / 过表达）对光滑念珠菌 DNA 损伤与复制胁迫耐受性的影响，明确其胁迫响应的剂量效应。

验证酿酒酵母同源蛋白 ScAbf1 能否回补光滑念珠菌 abf1Δ 菌株的致死表型，明确 Abf1 蛋白核心功能在不同酵母菌中的进化保守性。

完善 CgAbf1 的功能图谱，为解析光滑念珠菌独特的 DNA 损伤响应机制、开发新型抗真菌靶点提供理论基础。

4. 研究思路

生物信息学预分析：比对 CgAbf1 与 ScAbf1 的氨基酸序列同源性，通过 OmegaFold 预测二者的三维蛋白结构，利用 TM-align 进行结构域比对，明确保守功能域，锁定 C 端 CS2 结构域（C 端 43 个氨基酸）为核心研究区域。

CgAbf1 的蛋白互作与亚细胞定位分析：构建双分子荧光互补（BiFC）实验载体，分别对全长 CgAbf1 与截短体 abf1–43 进行 VN/VC 标签融合，通过流式细胞术定量检测荧光信号，结合荧光显微镜与 DAPI 核染色，验证 CgAbf1 的同源二聚化能力、C 端截短对二聚化的影响，以及二聚体的细胞核定位。

CgAbf1 转录自调控机制研究：构建 CgABF1 启动子与 GFP 的转录融合报告载体，分别转入 CgAbf1 可诱导过表达 / 可抑制表达菌株、abf1–43 突变体中，通过流式细胞术时间梯度检测 GFP 荧光强度，明确 CgAbf1 对自身启动子的调控效应；结合 ChIP-qPCR 实验，验证 CgAbf1 对自身启动子的直接结合；同时检测 UV、HU 胁迫下启动子的活性变化。

胁迫条件下 CgAbf1 的翻译后调控分析：构建 Flag 标签融合的 CgAbf1 菌株，通过 Western blot 检测内源与过表达条件下，CgAbf1 在对数期、稳定期的蛋白水平，以及 UV 照射、HU 处理后的蛋白条带变化，解析其在不同胁迫下的翻译后加工模式。

CgAbf1 胁迫响应功能的表型验证：通过点板生长实验，分别检测野生型、abf1–43 截短突变体、CgAbf1 过表达菌株、CgAbf1 回补菌株，在 UV 照射、HU、MMS 处理下的生长表型，明确 CgAbf1 及其 C 端结构域在 DNA 损伤与复制胁迫存活中的核心作用。

ScAbf1 的异源功能回补实验：通过两种独立策略验证回补效应，一是构建 CgABF1 启动子驱动 ScABF1 的复制型质粒，通过质粒丢失实验验证其能否回补 abf1Δ 的致死表型；二是将 ScABF1 原位整合至光滑念珠菌 CgABF1 基因组位点，通过质粒丢失与生长速率检测，验证其功能回补效果。

结果整合与机制总结：结合所有实验结果，梳理 CgAbf1 的结构 - 功能关系，明确其在 DNA 损伤与复制胁迫响应中的核心作用，对比其与 ScAbf1 的功能保守性与物种特异性，提出研究局限与未来研究方向。

5. 研究亮点

首次揭示 CgAbf1 在 DNA 损伤与复制胁迫响应中的全新功能：突破了既往仅关注其端粒沉默、细胞周期调控的研究局限，证实该必需蛋白是光滑念珠菌应对 UV 诱导 DNA 损伤的关键因子，同时参与复制胁迫响应，完善了光滑念珠菌 DNA 损伤响应的调控网络。

实现 CgAbf1 功能结构域的精准拆分：明确了 CgAbf1 的 C 端 43 个氨基酸是 UV 损伤响应的特异性核心区域，而该区域不参与同源二聚化与自身转录负调控，首次将 CgAbf1 的不同功能精准定位至对应结构域，为后续功能解析提供了清晰的结构基础。

发现 CgAbf1 响应不同胁迫的差异化翻译后调控模式：首次证实 CgAbf1 在 HU 诱导的复制胁迫下会产生特异性剪切产物，而在 UV 诱导的 DNA 损伤下仅保留全长蛋白，揭示了其响应不同胁迫的翻译后调控特异性，为解析其胁迫响应的分子机制提供了全新视角。

明确 CgAbf1 的精准剂量调控效应：证实无论是 CgAbf1 表达缺失、截短还是过表达，都会导致菌株对 DNA 损伤与复制胁迫的敏感性升高，甚至过表达本身就会造成细胞活力急剧下降，揭示了其转录自调控的核心生理意义 —— 维持胞内蛋白水平的精准稳态，以保障细胞存活与胁迫响应能力。

首次证实 ScAbf1 对 CgAbf1 缺失致死表型的完全回补效应：通过质粒表达与基因组原位整合两种策略，证实酿酒酵母 ScAbf1 可完全回补光滑念珠菌 abf1Δ 的致死表型，且基因组整合表达可使菌株恢复野生型生长速率，明确了 Abf1 蛋白核心必需功能在酵母菌中的进化保守性，为跨物种借鉴 ScAbf1 的研究成果解析 CgAbf1 功能提供了实验依据。

解析了 CgAbf1 的同源二聚化与转录自调控机制：首次证实 CgAbf1 可在细胞核内形成同源二聚体，且通过直接结合自身启动子实现转录负调控，完善了该蛋白的基础生物学特性研究，为解析其转录调控网络提供了核心依据。

6. 可延伸的方向

解析 CgAbf1 的 C 端 43 个氨基酸调控 UV 损伤响应的具体分子机制，验证其是否通过与核苷酸切除修复（NER）通路核心蛋白（如 Rad7、Rad16）直接互作参与 DNA 修复，或是通过调控细胞周期检查点实现损伤后的细胞周期阻滞。

鉴定 HU 处理下 CgAbf1 特异性剪切产物的序列与修饰特征，明确该产物是特异性蛋白水解的结果，还是磷酸化、SUMO 化等翻译后修饰的产物，解析其在复制胁迫响应中的具体功能。

探究 CgAbf1 在光滑念珠菌非经典 DNA 损伤检查点响应中的作用，解析其与 Rad53 等核心检查点蛋白的调控关系，完善该病原菌独特的 DNA 损伤响应机制研究。

鉴定 CgAbf1 同源二聚化的关键结构域，解析二聚化对其 DNA 结合能力、转录调控功能及胁迫响应能力的影响，完整构建 CgAbf1 的结构 - 功能对应关系。

验证 ScAbf1 回补菌株在 UV 损伤、复制胁迫下的生长表型，明确 ScAbf1 能否完全替代 CgAbf1 的胁迫响应功能，解析二者功能保守性与物种特异性的分子基础。

探究 CgAbf1 的 DNA 损伤响应功能与其毒力调控的关联，通过宿主感染模型检测 abf1–43 突变体的毒力变化，明确该蛋白能否作为新型抗真菌药物开发的潜在靶点。

结合 ChIP-seq 与转录组测序，全基因组鉴定 CgAbf1 的 DNA 结合靶基因与转录调控网络，明确其在 DNA 损伤胁迫下是否直接调控 DNA 修复、细胞周期相关基因的表达。

探究 CgAbf1 的翻译后修饰（磷酸化、SUMO 化等）对其胁迫响应功能的影响，解析不同胁迫下修饰模式的动态变化。

7. 测量的数据、对应图表及研究意义

CgAbf1 与 ScAbf1 的同源性与三维结构分析数据，对应Fig.1

包含二者的功能结构域比对、氨基酸序列同源性分析、全长蛋白三维结构预测、各保守结构域的 TM-score 结构比对结果。

研究意义：明确了 CgAbf1 与 ScAbf1 的整体序列同源性为 63.87%，其中锌指 DNA 结合结构域同源性达 90.24%，C 端 CS2 结构域的三维结构高度保守（TM-score 0.75688），而蛋白整体结构保守性较低；为后续 C 端结构域的功能研究、ScAbf1 的异源回补实验提供了核心生物信息学依据，精准锁定了 C 端 43 个氨基酸为核心研究区域。

CgAbf1 同源二聚化的 BiFC 实验数据，对应Fig.2

包含 BiFC 实验的载体构建示意图、流式细胞术检测的不同组合菌株的相对荧光单位（RFU）定量结果、荧光显微镜观察的二聚体亚细胞定位与 DAPI 核染色共定位结果。

研究意义：首次证实 CgAbf1 可在光滑念珠菌细胞核内形成同源二聚体，且 C 端 43 个氨基酸的缺失不影响二聚体的形成与细胞核定位；通过阴性、阳性对照验证了实验的特异性，明确了 CgAbf1 的蛋白互作特性，为解析其转录调控与胁迫响应的分子机制提供了蛋白互作层面的基础。

CgAbf1 转录自调控与胁迫下启动子活性分析数据，对应Fig.3

包含 CgAbf1 可诱导过表达 / 抑制菌株中 ABF1 启动子驱动的 GFP 荧光强度时间梯度结果、ChIP-qPCR 检测的 CgAbf1 与自身启动子的结合富集结果、abf1–43 突变体中 ABF1 启动子活性结果、UV 与 HU 处理下 ABF1 启动子活性的时间梯度检测结果。

研究意义：证实 CgAbf1 通过直接结合自身启动子区域，对自身转录进行负调控，以此维持胞内蛋白水平的稳态；明确了 C 端 43 个氨基酸的缺失不影响该转录自调控功能；同时证实 UV 照射与 HU 处理不会显著改变 ABF1 启动子的活性，说明 CgAbf1 在 DNA 损伤与复制胁迫下不受转录水平调控，为后续翻译后调控的研究提供了关键依据。

CgAbf1 在不同条件下的蛋白水平与翻译后加工数据，对应Fig.4

包含内源启动子与过表达启动子驱动的 CgAbf1 在对数期、稳定期的 Western blot 检测结果、UV 照射与 HU 处理下 CgAbf1 的蛋白条带变化结果。

研究意义：证实内源启动子驱动的 CgAbf1 在对数期与稳定期均处于极低表达水平，与转录自调控的结果一致；过表达条件下可检测到全长 CgAbf1 与两条特异性剪切条带；首次发现 CgAbf1 在 UV 与 HU 胁迫下存在差异化的翻译后加工：HU 处理下保留特异性剪切条带，而 UV 照射下剪切条带消失、仅保留全长蛋白，揭示了其响应不同胁迫的特异性翻译后调控模式，为解析其胁迫响应机制提供了翻译后层面的核心证据。

不同菌株在 DNA 损伤与复制胁迫下的生长表型数据，对应Fig.5

包含对数期预处理的菌株在 UV 照射、HU、MMS 处理下的点板生长结果、稳定期菌株在上述胁迫下的 10 倍梯度稀释点板生长结果。

研究意义：完成了 CgAbf1 胁迫响应功能的核心验证，明确了 abf1–43 突变体对 UV 诱导的 DNA 损伤高度敏感，而对 HU、MMS 的敏感性无显著变化，证实 C 端 43 个氨基酸是 UV 损伤响应的特异性关键区域；证实 CgAbf1 过表达会导致细胞基础生长缺陷，同时对 UV、HU、MMS 均表现出超敏表型，明确了 CgAbf1 的表达剂量对细胞存活与胁迫响应的关键作用；通过野生型回补菌株验证了表型的特异性，最终证实 CgAbf1 是光滑念珠菌应对 UV DNA 损伤与复制胁迫的必需因子。

ScAbf1 异源功能回补实验数据，对应Fig.6

包含质粒丢失实验的示意图、不同质粒的丢失率统计结果、质粒表达与基因组原位整合两种回补策略的示意图、不同回补菌株的倍增时间统计结果。

研究意义：通过两种独立的实验策略，首次证实 ScAbf1 可完全回补光滑念珠菌 abf1Δ 菌株的致死表型，明确了 Abf1 蛋白的核心必需功能在酿酒酵母与光滑念珠菌中具有进化保守性；同时发现质粒表达的 ScAbf1 会导致菌株生长速率下降，而基因组原位整合的 ScAbf1 可使菌株恢复野生型生长速率，为跨物种解析 Abf1 的功能提供了关键实验依据，也为真菌中 Abf1 蛋白的进化研究提供了核心数据。

研究用菌株、质粒、引物的完整信息，对应Table 1、Table 2、Table 3

Table 1 为光滑念珠菌菌株名录，包含亲本菌株、基因型、来源；Table 2 为实验用质粒名录，包含受体质粒、核心基因型、来源；Table 3 为寡核苷酸引物序列，包含引物编号、序列、酶切位点、杂交位点。

研究意义：完整呈现了本研究所有遗传学实验材料的背景信息，保证了实验的可重复性与可追溯性，为后续研究者重复实验、拓展研究提供了完整的材料参考，是所有分子生物学与遗传学实验的基础支撑。

补充实验验证数据，对应Supplementary Fig. S1-S4、Supplementary Table S1-S2

包含 MT-1 启动子在不同培养基中的活性检测结果、蛋白凝胶考马斯亮蓝染色上样对照结果、CgAbf1 过表达后的细胞活力时间梯度结果、ScAbf1 基因组整合菌株的构建与鉴定结果、BiFC 实验的 RFU 原始数据。

研究意义：为正文核心结论提供了严谨的对照与补充验证，明确了 MT-1 启动子的诱导效率与培养基依赖性，保证了 Western blot 实验的上样一致性，量化了 CgAbf1 过表达的细胞毒性，验证了菌株构建的正确性，进一步强化了正文结论的严谨性与可靠性。

8. 研究结论

CgAbf1 与酿酒酵母 ScAbf1 的核心功能结构域具有保守性，其中锌指 DNA 结合结构域序列高度同源，C 端 CS2 结构域的三维结构高度保守，而蛋白整体三维结构的保守性较低。

CgAbf1 可在光滑念珠菌的细胞核内形成同源二聚体，且该二聚化过程不依赖于其 C 端 43 个氨基酸（CS2 结构域的核心区域）。

CgAbf1 通过直接结合自身启动子区域，对自身转录进行负调控，以此维持胞内蛋白水平的稳态；该转录自调控功能同样不依赖于 C 端 43 个氨基酸；且 UV 诱导的 DNA 损伤与 HU 诱导的复制胁迫，不会在转录水平调控 CgABF1 的表达。

CgAbf1 在不同胁迫下存在差异化的翻译后调控：在 HU 诱导的复制胁迫下，CgAbf1 会产生特异性的剪切产物，而在 UV 诱导的 DNA 损伤胁迫下，仅全长形式的 CgAbf1 存在，提示全长 CgAbf1 是 UV 损伤响应的功能形式。

CgAbf1 是光滑念珠菌应对 UV 诱导的 DNA 损伤的关键因子，其 C 端 43 个氨基酸是该功能的核心区域，该区域的缺失会导致菌株对 UV 损伤高度敏感；同时，CgAbf1 的过表达会造成细胞基础生长缺陷，并导致菌株对 UV 损伤、HU 复制胁迫、MMS 损伤均表现出超敏表型，说明胞内 CgAbf1 的水平需要精准调控以维持细胞稳态与胁迫响应能力。

酿酒酵母的 ScAbf1 可完全回补光滑念珠菌 abf1Δ 菌株的致死表型，其中基因组原位整合表达的 ScAbf1 可使菌株恢复野生型的生长速率，证实 Abf1 蛋白的核心必需功能在酵母菌中具有进化保守性。

综上，CgAbf1 是光滑念珠菌中具有多重功能的必需蛋白，除已报道的亚端粒沉默、细胞周期调控、黏附素表达调控外，还在 UV 诱导的 DNA 损伤与复制胁迫响应中发挥关键作用，其 C 端 CS2 结构域是胁迫响应功能的核心区域，而自身转录负调控与同源二聚化则不依赖于该区域。

9. 芬兰 Bioscreen 仪器测量的微生物生长曲线数据的研究意义详细解读

本研究中使用芬兰 Bioscreen C 全自动微生物生长分析仪，完成了 CgAbf1 过表达菌株的细胞活力定量检测、菌株倍增时间计算等核心实验，其测量的生长曲线数据是本研究多个核心结论的关键支撑，具体研究意义可分为以下 7 个层面：

精准量化 CgAbf1 过表达的细胞毒性与活力损失动态

本研究通过 Bioscreen 仪器，对 CgAbf1 过表达诱导后 3h、6h、9h、24h 的菌株进行了 48 小时连续培养，每 15 分钟采集一次 OD600 数据，生成了完整的生长曲线。基于指数生长期（OD600 0.2-0.5）的斜率计算出菌株的精准倍增时间 δ，再通过生长曲线的时间偏移量 Δtn，计算出不同诱导时间下的细胞相对活力。该数据首次实现了 CgAbf1 过表达毒性的绝对定量，明确了诱导 3h 后细胞活力降至 50%，6h 后仅剩余 0.5%，为 “CgAbf1 过表达本身具有强细胞毒性” 的核心结论提供了金标准的定量支撑，突破了传统点板实验仅能定性判断 “生长 / 不生长” 的局限，精准解析了毒性的时间梯度与作用幅度。

消除系统误差，保证活力计算的准确性与可重复性

Bioscreen 仪器的 100 孔蜂窝板可实现上百个样本的同步恒温培养与原位 OD 检测，保证了所有时间点、所有生物学重复样本的培养温度、震荡频率、检测条件完全一致。相较于传统的试管摇床培养、人工定时取样测 OD 的方法，彻底消除了分批培养的环境波动、取样时间差异、人为操作误差等系统误差；同时，仪器的高灵敏度可捕捉到 OD600 低至 0.01 的细微生长变化，避免了传统 CFU 平板计数法中低活力样本的计数误差，使得倍增时间、细胞活力的计算结果具有极高的重复性与可靠性，为 CgAbf1 过表达的毒性量化提供了严谨的实验数据。

为 ScAbf1 异源回补的功能验证提供了核心定量依据

本研究通过 Bioscreen 生长曲线，计算了野生型、CgAbf1 质粒回补菌株、ScAbf1 质粒回补菌株、ScAbf1 基因组整合菌株的倍增时间，明确了质粒表达 ScAbf1 的菌株倍增时间显著长于野生型，而基因组原位整合 ScAbf1 的菌株倍增时间与野生型无显著差异。该定量数据不仅证实了 ScAbf1 可回补 CgAbf1 缺失的致死表型，更精准区分了不同表达模式下回补效果的差异，明确了基因组原位整合是实现完全功能回补的最优方式，为 Abf1 蛋白的功能保守性研究提供了精准的定量表型支撑，而非仅靠定性的 “存活 / 死亡” 判断。

建立了光滑念珠菌必需基因表达剂量效应的标准化定量分析体系

本研究基于 Bioscreen 生长曲线建立的 “倍增时间 - 生长曲线偏移 - 相对活力计算” 体系，为光滑念珠菌中必需基因的功能研究提供了标准化的定量方法。相较于传统的 CFU 平板计数法，该方法无需繁琐的梯度稀释与平板涂布，可在 48 小时内实现数十个样本的自动化活力检测，大幅提升了实验效率；同时，连续生长曲线可同步分析菌株的生长迟滞期、最大生长速率、最大生物量等多个生长参数，而非仅终点活力值，为解析基因过表达的毒性机制、基因功能的剂量效应提供了更全面的表型数据。

验证了 MT-1 启动子的诱导活性与培养基依赖性

补充实验中，通过 Bioscreen 配套的荧光检测与生长曲线同步分析，明确了 MT-1 启动子在 YNB 培养基中的诱导活性是 YPD 培养基中的 3-5 倍，为 CgAbf1 过表达实验的培养基选择提供了直接的定量依据，保证了过表达实验的诱导效率，避免了因启动子活性不足导致的假阴性结果，为后续光滑念珠菌中铜诱导启动子的应用提供了关键参考数据。

为后续 CgAbf1 胁迫响应的深度研究提供了高通量、高灵敏度的技术方法

本研究建立的 Bioscreen 检测方法，可直接拓展至 UV、HU、MMS 等胁迫下菌株的生长表型定量分析。相较于点板实验仅能观察终点生长情况，Bioscreen 的连续生长曲线可精准量化不同胁迫剂量下、不同菌株的生长抑制程度、胁迫适应能力与半抑制浓度（IC50），为后续解析 CgAbf1 在不同胁迫下的功能、筛选其上下游调控基因、验证抗真菌化合物的活性，提供了高灵敏度、高通量的定量分析工具。

为 CgAbf1 的细胞周期调控功能提供了补充验证

基于 Bioscreen 生长曲线计算的倍增时间，可直接反映菌株的细胞周期进程。本研究中 abf1–43 突变体、CgAbf1 过表达菌株的倍增时间显著延长，与既往研究中 “CgAbf1 表达异常会导致细胞周期阻滞” 的结论完全一致，从群体生长层面验证了 CgAbf1 对细胞周期进程的调控作用，实现了单细胞水平的细胞周期检测与群体水平的生长表型验证的相互印证，进一步强化了结论的可靠性。