实验部分
微生物
使用肠炎沙门氏菌CECT 4155、CECT 4300和CECT 4396以及大肠杆菌O157:H7 CECT 4972（来自西班牙典型菌种保藏中心）作为测试菌株。使用INIA菌种保藏中心的罗氏乳杆菌INIA P579生产罗氏菌素。菌株在胰蛋白胨大豆酵母提取物肉汤（TSYEB）中补充150 g L⁻¹甘油，于-80°C保存为储备培养物。在实验使用前，每个分离株在37°C下于TSYEB中转接两次，培养18小时。使用全自动微生物生长曲线分析仪（Bioscreen C）监测测试病原体的指数生长期不超过15小时，使用DMFit excel插件程序调整动力学参数。所有病原体在静止期早期接种到冷熏制鲑鱼中。通过混合在37°C下分别培养18小时的三种肠炎沙门氏菌菌株培养物等量部分，制备三菌株混合液。
样品制备
冷熏制鲑鱼购自西班牙马德里当地市场，在实验室中无菌分割为20 g小块。通过将100 μL每种病原体培养物涂布在表面进行接种，最终浓度达到10⁵-10⁶ CFU g⁻¹，并在抗菌处理前于4°C保持20小时以使细胞适应低温。样品分为八个不同组：对照组（未加压且无抗菌物）、REU（含罗氏菌素）、LPS（含乳过氧化物酶）、LF（含乳铁蛋白）、HHP（加压）、REU+HHP（加压含罗氏菌素）、LPS+HHP（加压含乳过氧化物酶）和LF+HHP（加压含乳铁蛋白）。
抗菌物
罗氏菌素由罗氏乳杆菌INIA P579在甘油厌氧发酵过程中获得，按照方法进行冻干和纯化，并稍作修改。纯化罗氏菌素用无菌蒸馏水复溶至1.3 mol L⁻¹，作为测定用储备溶液。罗氏菌素以最终浓度16 mmol L⁻¹添加到冷熏制鲑鱼表面。
牛乳乳过氧化物酶（DMV International Nutritionals）用去离子蒸馏水配制（15 mg mL⁻¹），用0.22 μm孔径醋酸纤维素滤膜灭菌，于-40°C保存。根据方法，在添加到样品前通过测定2,2'-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（ABTS）在412 nm处的氧化来定量乳过氧化物酶活性，并按方法以ABTSU表示。硫氰酸钾（KSCN）配制成1 mol L⁻¹水溶液并灭菌。300 mL L⁻¹过氧化氢水溶液购自默克公司。LPS通过添加乳过氧化物酶至终活性2.8 ABTSU g⁻¹，随后添加40 μL g⁻¹ KSCN和10 μL g⁻¹ H₂O₂来激活。
牛LF（DMV International Nutritionals）配制成50 mg mL⁻¹，用0.20 μm孔径醋酸纤维素滤膜灭菌，于-20°C保存至使用。LF以最终浓度1 g L⁻¹添加到冷熏制鲑鱼表面。
所有抗菌物在加压前立即添加。
样品加压
添加抗菌物后，冷熏制鲑鱼样品在多层高阻隔袋（200 mm × 300 mm）中真空包装，在容量3.5 L、最大工作压力600 MPa的原型ACIP 6000中于450 MPa加压5分钟。压缩速率约为160 MPa min⁻¹，释压时间为25秒。作为传压介质的水初始温度为6°C，加压后样品温度约为11°C。加压和对照样品在4°C和10°C下保持35天贮藏。进行了三次独立试验，每次设重复样品。
微生物分析
在处理后1、7、21和35天分析冷熏制鲑鱼。样品（20 g）用无菌1 g L⁻¹蛋白胨水溶液十倍稀释，均质90秒。在相同无菌溶液中制备均质液的十进制稀释液。沙门氏菌数量在沙门氏菌志贺氏菌琼脂（SSA）平板上于37°C培养24小时测定。大肠杆菌数量在紫红胆盐琼脂（VRBA）平板上于37°C培养24小时测定。
统计分析
使用SPSS Statistics 22.0软件进行方差分析，以处理和冷藏时间为主要效应。通过Tukey检验评估相同贮藏时间均值之间差异的显著性，置信区间为95%。
结果与讨论
肠炎沙门氏菌和大肠杆菌O157:H7在经罗氏菌素、LPS和LF单独或联合450 MPa HHP处理5分钟并于4°C和10°C贮藏的冷熏制鲑鱼中的存活情况分别显示在表1和表2中。
对照样品中的沙门氏菌初始数量（表1）为5.47 log CFU g⁻¹，在整个冷藏期间维持不变。处理后1天，HHP将病原体水平显著（P < 0.05）降低至2 log单位以下或更低。然而，当罗氏菌素、LPS或LF单独添加到鲑鱼中时，未观察到沙门氏菌数量的变化。在冷藏期间，所有处理样品中的病原体水平均降低，在4°C和10°C贮藏的LPS处理鲑鱼中分别实现1.54和1.26 log CFU g⁻¹的更高降低。单独加压或与抗菌物联合加压的冷熏制鲑鱼中的沙门氏菌数量在4°C和10°C贮藏35天后低于检测限（<<1 log单位）。
| 温度 (°C) | 处理组 | 第1天 | 第7天 | 第21天 | 第35天 |
|---|---|---|---|---|---|
| 4 | Control (对照) | 5.99±0.36bB | 5.72±0.03bB | 5.61±0.07cAB | 5.25±0.16cA |
| REU (路特林) | 5.91±0.28bB | 5.59±0.21bAB | 5.58±0.17bAB | 5.33±0.25cA | |
| LPS (乳过氧化物酶系统) | 5.63±0.08bB | 5.63±0.11bB | 5.37±0.47bB | 3.93±0.57bA | |
| LF (乳铁蛋白) | 5.47±0.31bA | 5.75±0.09bA | 5.23±0.26bA | 5.40±1.21cA | |
| HHP (高压处理) | 2.00±0.00aA | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA | |
| REU+HHP | 1.50±0.58aA | 1.50±0.58aA | <1.00aA | <1.00aA | |
| LPS+HHP | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA | |
| LF+HHP | 1.98±1.13aA | 1.74±0.85aA | 1.65±0.75aA | <1.00aA | |
| 10 | Control (对照) | 6.30±0.07bB | 6.34±0.14dB | 6.04±0.07cB | 5.21±0.22cA |
| REU (路特林) | 5.74±0.22bA | 5.75±0.11cA | 5.56±0.03bA | 5.63±0.12dA | |
| LPS (乳过氧化物酶系统) | 5.81±0.12bBC | 5.46±0.17bB | 6.01±0.48cC | 4.21±0.00bA | |
| LF (乳铁蛋白) | 5.82±0.47bAB | 5.90±0.16cB | 5.58±0.14bAB | 5.31±0.21cA | |
| HHP (高压处理) | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA | |
| REU+HHP | 1.85±0.98aA | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA | |
| LPS+HHP | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA | |
| LF+HHP | 1.89±1.03aA | <1.00aA | <1.00aA | <1.00aA |
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