摘要
民族药理学依据：贯叶连翘（Hypericum ascyron L.）作为一种传统药物，用于治疗伤口、肿胀、头痛、恶心、胃痛、脓肿、痢疾和慢性支气管炎。需要进行药理学研究，为其传统用途提供科学依据。本研究调查了贯叶连翘提取物的抗菌作用及其机制。
材料与方法：通过MTT法评估贯叶连翘提取物的抗菌活性。为了确认贯叶连翘提取物对细菌细胞的作用机制，进行了Annexin V/碘化丙啶（PI）双染色、TUNEL和DNA Laddering分析。
结果：测试了贯叶连翘提取物对阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌的抗菌效果，结果表明，贯叶连翘提取物的敏感菌主要包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌，尤其是藤黄微球菌。贯叶连翘提取物对藤黄微球菌的MBC值等于MIC值（20 mg/mL）。贯叶连翘提取物可通过凋亡途径诱导藤黄微球菌细胞死亡。
结论：本研究为贯叶连翘的一些传统用途和药理学活性提供了科学支持。我们的数据为民间使用贯叶连翘提供了合理依据。
一、引言
细菌对抗生素的耐药性正在急剧增加，因此迫切需要开发新型抗菌药物。许多从植物中提取的抗菌剂显示出巨大的治疗潜力。它们可以显著减轻传染病，但缺乏传统抗菌剂常伴随的不良副作用，包括超敏反应、过敏反应和免疫抑制。许多先前的研究已经证明了传统草药代谢物对微生物的作用。特别是，金丝桃属（Hypericum）是一个重要的属，可以产生具有抗菌特性的次级代谢产物。
贯叶连翘（Hypericum ascyron L.）属于金丝桃科，是一种中药，用于治疗伤口、肿胀、头痛、恶心、胃痛、脓肿、痢疾和慢性支气管炎。最近的研究揭示了贯叶连翘药理学活性的多种机制，包括抑制组胺释放、抗炎和镇痛作用、抗氧化活性、抑制葡萄糖苷酶、抗糖尿病活性、抗菌活性和抗肿瘤活性。然而，迄今为止，贯叶连翘抗菌作用的详细机制尚未阐明。
凋亡是一种遗传调控的程序性细胞死亡形式，对于多细胞生物的发育和长期生存能力至关重要。凋亡发生在响应各种细胞内和细胞外刺激和压力时。这些生理变化的累积效应旨在诱导细胞周期停滞、停止DNA修复和稳态、灭活凋亡抑制蛋白、促进超微结构修饰并标记垂死细胞，从而实现生物分子结构的解构、细胞内容的分解和死亡标记。
在本研究中，我们证明贯叶连翘提取物可以诱导细菌细胞死亡，并且这种效应伴随着DNA断裂、膜电位耗散和结构完整性的丧失，表明凋亡可能在贯叶连翘提取物诱导的细菌细胞死亡过程中起关键作用。
二、材料与方法
2.1.植物材料
所有贯叶连翘样品于2012年8月从中国内蒙古自治区海拉尔市采集。所有标本均由孙亚鸿（中国内蒙古自治区根河市农牧业局）鉴定。凭证标本保存在中国天津科技大学生物工程学院（标本编号：HA20120806）。
2.2.提取
贯叶连翘提取物的提取过程按照我们之前的方法进行。简言之，收获干燥植物的地上部分，然后过60目筛。准确称取每份样品粉末（1.00克），使用30毫升6:4(v/v)的乙醇-水溶液，在30°C下超声提取30分钟。在5000g离心10分钟后，将洗脱液在40±2°C下旋转蒸发，冻干，并储存在-20°C。
2.3.HPLC分析
贯叶连翘提取物的HPLC分析按照我们之前的方法进行。简言之，使用由Agilent 1200系列泵、自动进样器、二元泵和1200系列紫外-可见二极管阵列（DAD）检测器组成的HPLC系统进行分析。HPLC分离在Kromasil C18柱（250 mm x 4.6 mm i.d.;5μm）上进行。使用乙腈（溶剂A）和含0.1%乙酸的水（溶剂B）作为流动相。梯度洗脱程序如下：0至5分钟，溶剂A从5%线性变化至10%；5至10分钟，溶剂A从10%线性变化至15%；10至15分钟，溶剂A从15%线性变化至17%；15至30分钟，溶剂A在17%等度洗脱；30至60分钟，溶剂A从17%线性变化至25%；60至90分钟，溶剂A从25%线性变化至45%。
2.4.菌株
大肠杆菌（ATCC 25922）、阴沟肠杆菌（ATCC 13047）、肺炎克雷伯菌（ATCC 10031）、金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）和藤黄微球菌（ATCC 10240）由中国普通微生物菌种保藏中心（CGMCC）提供，并在Mueller-Hinton琼脂（Hopebio，中国）中保存，储存在-20°C。