人类胃肠道样本采集
粪便
a.成年人粪便
1)在收集粪便样本前将尿液排尽,避免尿液污染粪便。将无菌粪便收集盒(或其他无菌收集器)放入蹲式(或坐式)马桶后排便,确保粪便排入盒中。
2)将手洗干净或戴上无菌手套,拧开2mL无菌冻存管盖,将灭菌拭子的棉头插入粪便中,并轻微搅动。
※注意:因粪便表层含有肠粘膜脱落细胞,而外部容易污染,且接触空气后,部分细菌DNA开始降解,所以取样时应取中段内部的粪便样本。
3)用拭子取黄豆大小(约50mg)样本放入螺口冻存管,取出棉签,旋紧冻存管盖。一式三管,一管用于测序实验,另外两管备份。
4)将冻存管放入自封袋中,并封紧,马上放入装有碎冰或冰袋的保温盒中,在短时间(最长不超过4h)送至实验室进行DNA抽提或-80℃保存,防止反复冻融。
b.婴儿粪便
1)在收集粪便样本前将尿液排尽,避免尿液污染粪便。
2)带一次性无菌手套,将新鲜粪便收集到无菌粪盒里,或采用润滑的无菌医用拭子对会阴部刺激促进排便。然后用无菌拭子挑取粪便至无菌螺口冻存管,一式三管,每管约50-100mg,一管用于测序实验,另外两管备份。
3)将冻存管放入自封袋中,并封紧,马上放入装有碎冰或冰袋的保温盒中,在短时间(最长不超过4h)送至实验室进行DNA抽提或-80℃保存。防止反复冻融。
肛拭子/直肠拭子
1)不易获得粪便时,可采用直肠拭子法进行肠道微生物样本的采集。
2)使用肥皂、水和70%的酒精分别清洁肛门周围,然后将无菌拭子用生理盐水湿润后插入肛门4~5cm(幼儿2~3cm)肛门括约肌处轻柔的旋转,于肛门隐窝处取样(拭子上明显可见粪便痕迹),每个样本提供3-5个拭子。
3)然后插入无菌冻存管(或将棉拭子头部剪落入冻存管中),旋紧盖子,马上放入装有碎冰或冰袋的保温盒中。
4)在短时间(最长不超过4h)送至实验室进行DNA抽提或-80℃保存。
肠道灌洗液
1)将肠道灌洗液低速离心(800-1000g离心5min)收集上清液,将上清液过0.22μm可拆卸的滤膜,收集滤膜;放入-80℃冰箱保存。
2)或者将肠道灌洗液先低速离心(800-1000g离心5min)收集上清液,然后将上清液12,000g离心10min,弃上清保留沉淀,然后将沉淀管装入自封袋密封,放-80℃冰箱保存。
人类泌尿生殖道样本采集
宫腔分泌物/阴道分泌物(拭子)
1)48h内无性行为,不得进行私处清洗、上药等改变菌群结构的行为,30d内不能用抗生素和抗真菌类药物。
2)将采样拭子伸入需要取样部位,按压深度约为拭子直径,来回滚动擦拭四次,以覆盖整个拭子,然后取出。采集2~3根拭子。
3)将拭子插入无菌冻存管(或将拭子头部剪落入冻存管中),旋紧盖子,马上放入装有碎冰或冰袋的保温盒中,在短时间(最长不超过4h)送至实验室进行DNA抽提或-80℃保存。
尿液
1)采集尿液之前用中性肥皂水或者清水对尿道口周围进行清洁。
2)集受试者晨尿的中段尿液50mL左右(中段尿:在排尿过程中,弃去前、后时段排出的尿液,以无菌容器收集中间时段的尿液;或在开始排尿3s后采集尿液,当尿液量达到50mL,即认为完成收集)。
3)将尿液样本马上放入装有碎冰或冰袋的保温盒中,在短时间(最长不超过4h)送至实验室进行菌体富集。尿液在4℃,1000g离心5min;取上清继续10,000g离心5min富集菌体(需达到0.2-0.3g)。将沉淀立即置于-80℃保存。
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