人类呼吸道样本采集
鼻咽拭子
1)受试者采样前1h内禁止进食和饮水。
2)口咽部样本采集选择头口连接处到扁桃体柱头间的区域。
3)左右鼻咽样本采集方式为拭子穿过鼻孔后擦拭。
4)口咽部麻醉后用灭菌棉拭子在受试者口/鼻咽采集部位旋转1周，在取样时避免触及舌、口颊黏膜和唾液、鼻腔等非采集部位。
5)取样后将棉拭子头（2-3个）剪下放入灭菌冻存管，液氮速冻，-80℃保存，干冰寄送。
痰液
1)自行咳痰采集：晨痰为佳，用冷水漱口，深吸气后用力咳出呼吸道深部痰液。
2)吸痰器吸引采集：医护人员协助患者取适当体位，自下而上叩击患者背部，然后将吸引器及可控吸痰杯连接，抽吸痰液于无菌痰液采集容器中。
3)气管镜采集：联系内窥镜室，协助医生在气管镜引导下，直接采集标本。
4)使用收集管收集：使用收集管插入患者的气管中以获取痰液样本。
5)诱导咳痰采集：对咳痰困难者，先用湿牙刷清洁口腔粘膜、牙龈和舌，无菌水或生理盐水漱口，然后使用喷雾器吸入4mL 7%高渗盐水后，30min内收集诱导痰液至无菌容器里。
6)小儿取痰：用弯压舌板向后压舌，将棉拭子伸入咽部，小儿受到刺激喷出肺部或气管分泌物粘贴在拭子上。
※注意：
a.以晨痰为好，多数病人清晨痰较多，易于采集。
b.最好在抗菌药物之前或者抗菌药物停药一周后采集。
c.可使用无菌盐水(60mL)作为漱口水，以减少口腔微生物的污染。
d.呼吸道传染病患者痰液拒接，客户需自行提取DNA后送样。
气管
1)样本采集前使用生理盐水冲洗支气管镜管道。
2)受试者使用生理盐水漱口90s。
3)口咽喷雾麻醉后前端带有无菌棉签的支气管镜经口插入直达声门处取样（已经实施局部麻醉，并可见呼吸道分泌物）。
4)支气管镜取样后将棉拭子头（2-3个）剪下放入灭菌冻存管，同时生理盐水冲洗支气管镜管道。
5)棉拭子头和生理盐水冲洗液为采集到的样本，液氮速冻，-80℃保存，干冰寄送。
04
支气管肺泡灌洗液（BALF）
1)采集前准备：无菌生理盐水冲洗所使用器材支气管镜按照手术需求进行局部麻醉。
2)采集：经操作孔道注入适量无菌生理盐水（总量一般60-120mL，分次注入）负压吸引收集灌洗液，测微生物菌群建议体积量为50mL左右，尽量多，收集至无菌离心管/容器中。
3)样本处理：为去除部分组织碎片，可采取无菌滤膜（孔径：10μm左右）过滤，微生物样本收集，可通过继续过滤（孔径0.22μm滤膜），获取的滤膜需要放入冻存管中液氮速冻（若体积过大，可用无菌简单剪碎后放置）；也可使用离心法富集沉淀，液氮速冻。
4)寄送保存：液氮速冻样本后干冰运输，样本保存于-80℃冰箱。
※注意：不同病人的肺部微生物含量不一，可能有些病人灌洗下来的微生物量非常少，提取获得的DNA量也会很少，因此前期采样建议用大量的灌洗液灌洗，洗脱足够多的微生物。
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