1.3方法
1.3.1噬菌体分离纯化
采集污水样品，以PM B2为宿主菌进行噬菌体分离。将污水样品以8 000×g离心10 min，使用0.22µm滤器进行过滤。取对数生长期的PM B2菌悬液2 mL加入3 mL的LB液体培养基中，与过滤后的污水均匀混合。37℃恒温振荡培养6～8 h，将培养物在12 000×g离心5 min，用0.22µm滤器过滤，得到噬菌体增殖液。各取100µL噬菌体增殖液和PM B2菌悬液混匀后加入至融化的LB半固体培养基，混匀后覆盖在LB固体培养基上，置于37℃培养过夜。挑取单个透亮噬菌斑使用双层平板法连续纯化4～5次，以获得纯化的噬菌体。取纯化噬菌体液加入到对数生长期宿主菌中，37℃、160 r/min振荡培养4～6 h，收集培养液经离心、过滤后得到噬菌体增殖液置于4℃保存。
1.3.2噬菌体透射电镜观察
采用磷钨酸负染法进行观察。取10µL（1010 PFU/mL）的噬菌体原液滴加在铜网上，静置5 min，然后用2%磷钨酸溶液进行负染，滤纸吸去多余染色液，自然晾干。将制备好的样品置于透射电镜下观察。
1.3.3噬菌体生物学特性测定
1.3.3.1噬菌体最佳感染复数（multiplicity of infection，MOІ）测定
将100μL噬菌体悬液添加到900μL PM B2（约107 CFU/mL）中，以获得不同MOІ（噬菌体数量/被感染细菌数量＝100、10、1、0.1、0.01、0.001）的混合溶液。混合溶液在摇床培养箱中以180 r/min的振荡速度37℃培养4 h，采用双层平板法测定其效价。
1.3.3.2噬菌体一步生长曲线
将噬菌体液与宿主菌按照噬菌体MOІ＝0.1混合均匀，在37℃条件下孵育15 min后，8 000×g离心10 min，弃上清液，再用LB液体培养基洗涤3次，以去除未吸附的噬菌体。随后加入30 mL预热LB液体培养基，37℃、160 r/min振荡孵育120 min，每10 min吸取100μL样品测定噬菌体效价。
1.3.3.3噬菌体pH值稳定性和温度稳定性测定
为测定噬菌体不同pH值条件下的稳定性，将100μL噬菌体悬液添加到900μL不同pH值（2～12）的SM缓冲溶液中，37℃条件下孵育1 h后，使用双层平板法测定其效价，每组重复3次。
为测定噬菌体在不同温度条件下的稳定性，取1 mL噬菌体液分装于1.5 mL离心管中，分别置于4、25、37、40、50、60℃和70℃中孵育1 h后，使用双层平板法测定其效价，每组重复3次。
1.3.3.4不同MOІ噬菌体对细菌的裂解能力测定
将噬菌体（约为108 PFU/mL）和PM B2（约为107 CFU/mL）按照MOІ＝0.001、0.01、0.1、1和10各取100μL于96孔板中，置于37℃培养箱培养。同时设置对照组为仅加入细菌菌液和只含有LB培养基的空白组，每隔30 min检测OD600 nm值，共检测12 h。
1.3.3.5噬菌体宿主谱测定
为检测噬菌体宿主范围，采用点斑实验法对所有菌株（标准株为大肠杆菌ATCC 35150、沙门氏菌ATCC 14028、肺炎克雷伯菌ATCC 700603和金黄色葡萄球菌ATCC 25923）进行检测。取100μL细菌菌液加入到LB半固体中，混匀后均匀铺在LB固体平板上，冷却后取10μL噬菌体液滴加在双层平板上，37℃培养24 h，观察平板上是否出现噬菌斑。
1.3.4噬菌体基因组提取及全基因组分析
按照病毒基因组提取试剂盒操作说明提取噬菌体基因组，将满足测序要求的噬菌体基因组提交至生物公司进行测序。使用Іllumina NovaSeq平台进行测序，测序数据通过A5-MiSeq和SPAdes对噬菌体基因组进行拼接。使用NCBI对噬菌体进行核苷酸序列比对，使用RAST在线网站（http://rast.nmpdr.org/）注释基因组，注释后在NCBI的BLAST（https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）工具中进行校验。通过CARD数据库（https://card.mcmaster.ca/home）和毒性因子数据库（http://www.mgc.ac.cn/VFs/）检测噬菌体基因组中是否存在抗生素抗性基因和毒力基因。通过NCBI数据库分析比较与噬菌体PL1末端酶大亚基的相关基因序列，并使用MEGA 7.0构建系统发育进化树。噬菌体全基因组已提交至GenBank，基因登录号为PP502408。