2结果
2.1 Western blot检测ING5蛋白表达
为了检测ING5是否在所转染细胞中高表达,将A549-control和ING5高表达细胞对数生长期时用细胞裂解液提取总蛋白,Western blot结果显示与A549-control相比,ING5在A549-ING5-OE细胞中表达量显著增高。
2.2 ING5抑制肺癌细胞增殖
显微镜下观察可见A549-control和A549-ING5-OE细胞生长良好,紧密排列,形态为梭形,细胞之间形成连接。A549-ING5-OE细胞的增殖速度明显低于A549-control细胞,增殖速度为A549-control的一半,差异有高度统计学意义(P<0.01)。
2.3 ING5抑制肺癌细胞克隆形成能力
A549-control和A549-ING5-OE细胞接种在6孔板15 d后,计数细胞数多于50个的克隆,结果表明与A549-control相比ING5高表达肺癌细胞的克隆形成能力明显降低,A549-ING5-OE细胞的克隆形成率为A549-control细胞的50%,差异有高度统计学意义(P<0.01)。
2.4 ING5抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生长
裸鼠皮下接种A549-control和A549-ING5-OE细胞,7 d后成瘤,随着时间的增加,接种A549-control裸鼠肿瘤生长较快,接种A549-ING5-OE的裸鼠肿瘤生长明显较慢,结果表明ING5高表达后显著抑制裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生长。
2.5接种A549-ING5-OE及A549-control细胞后大鼠体积变化情况
接种A549-ING5-OE细胞成瘤,肿瘤体积大小基本无增加。A549-control细胞接种成瘤,肿瘤体积明显增大。从肿瘤生长曲线可以看出ING5高表达的肺癌细胞肿瘤生长明显被抑制,肿瘤体积较对裸鼠A549-control细胞接种显著减小。
3讨论
作为候选抑癌基因家族成员,近年来ING家族在肿瘤发生、发展过程中的作用和机制受到越来越多的关注。路美玲等研究结果表明,与正常肝组织相比,肝癌细胞株ING5 mRNA表达明显降低,在肿瘤转化过程中与正常组织相比ING5表达明显被抑制。赵春阳等研究结果表明,在肿瘤细胞中ING5表达水平越低,肿瘤的恶性程度就越高。
研究表明,肺癌的发生、发展以及侵袭、转移是多基因参与、多步骤发生的过程。随着近年来外科技术发展的日趋完善,新的化学治疗药物和局部治疗方法不断出现,但对肺癌的总体治疗效果却不甚理想,因此从分子水平研究肺癌发生、发展中的分子机制,针对肺癌中异常分子的治疗药物和治疗方法就成了新的研究热点,并促进了肺癌分子靶向治疗的出现。本研究中,通过慢病毒介导的基因转染方法使ING5在A549细胞中高表达,发现ING5高表达后与对照肺癌细胞相比,其增殖能力和克隆形成能力均降低,说明在细胞水平ING5抑制了肺癌细胞的增殖和克隆形成能力。通过裸鼠在体水平的研究同样发现,ING5抑制了裸鼠皮下成瘤及移植瘤的生长,动物实验研究结果同样说明ING5抑制了肺癌细胞的增殖,与上述细胞实验结果相符。
综上所述,ING5在肺癌细胞高表达后抑制了肺癌细胞的增殖,提示ING5在肺癌的发生和发展中起到了抑癌基因的作用,为肺癌的基因治疗提供了新的靶点。
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