间充质干细胞(Mesenchymal stromal/stem cell,MSC),是一类存在于多种组织(如骨髓、脐带血、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织等),具有多向分化潜能,非造血干细胞的成体干细胞。这类干细胞具有向多种间充质系列细胞(如成骨、成软骨及成脂肪细胞等)或非间充质系列的细胞分化潜能,并具有独特的细胞因子分泌功能。
间充质干细胞的多能性(Multipotent)是指具有形成机体内超过一种类型细胞的能力,在体外可诱导分化为骨和脂肪等多种功能细胞,并能表达调控细胞向其他组织细胞类型或器官分化的基因特性(如SSEA-4、OCT-4、SOX-2和NANOG基因均为多能性基因)。间充质干细胞是以细胞分裂的方式产生新细胞的特性,包括细胞周期中各不同阶段所占比例以及细胞分裂过程中细胞数量随时间变化的特征。需要对脐带间充质干细胞hUC-MSCs存活率、直径和生长曲线进行检测,以把控间充质干细胞的质量要求。
图为脐带间充质干细胞的细胞生长曲线。
一种脐带间充质干细胞存活率、直径和生长曲线的检测方法,包括以下步骤:
1)将脐带间充质干细胞接种于细胞培养板中,在37℃和体积浓度为5%CO2
下进行培养,收集细胞;
所述脐带间充质干细胞的接种密度为1×105细胞/ml;
2)将所述步骤1)得到的细胞制成细胞悬液,将所述细胞悬液在细胞活力分析仪上分析细胞存活率、直径和生长曲线;
所述细胞悬液的浓度为5×105~1×107细胞/ml。
脐带间充质干细胞的代数为2~6代。
细胞培养板为6孔细胞培养板。
培养的时间为10h。
培养使用的培养基包括无血清培养基,每孔添加量为2ml。
收集细胞的方法包括:在4℃、1200rpm下离心6min。
使用PBS缓冲液制备细胞悬液,所述PBS缓冲液的组分为NaCl8g/L、Na2HPO4·12H2O 2.9g/L、KCl 0.2g/L和KH2、PO4 0.2g/L。
优选的,每间隔12h分析1次。
检测的机理为:通常认为细胞膜丧失完整性即细胞死亡。有完整细胞膜的活性细胞能够抵御台盼蓝;而丧失细胞膜完整性的细胞通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。细胞活力分析仪通过成像系统色调的对比实现对细胞存活率的精确分析。