摘要［目的］为鉴定造成湛江某养殖场斜带石斑鱼大量死亡的病原，对皮肤滋生白色隆起疥疮的患病斜带石斑鱼进行解剖与细菌分离与纯化。［方法］通过生化反应、16SrRNA基因克隆与测序，构建系统进化树鉴定分离纯化获得的优势菌S1。采用OD600和平板活菌计数绘制V.harveyiS1生长曲线，以R2判断其生长曲线的相关性和可信度。［结果］鉴定结果显示S1为哈维氏弧菌，同V.harveyihq-V149聚为一支。药敏试验结果显示，斜带石斑鱼源的哈维氏弧菌S1对诺氟沙星、头孢氨苄、左氧氟沙星、环丙沙星等12种抗生素敏感，对青霉素G、氨曲南、链霉素、头孢唑林、头孢哌酮等12种抗生素不敏感。［结论］哈维氏弧菌S1是造成湛江某养殖场斜带石斑鱼大量死亡的病原，其指数生长时间为5～12h，随后进入平台期。
斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）又称青斑，是鲈形目鮨科下石斑鱼属物种，作为海水养殖代表物种之一，同大黄鱼、金枪鱼等经济物种一样具有高经济价值。人工养殖石斑鱼已有20多年历史，国内石斑鱼养殖多集中在广东、海南、福建。随着养殖技术的提高和养殖规模的扩大，养殖产量稳步提升，2017年石斑鱼养殖产量超过捕捞产量，其中广东养殖规模最大，到2022年广东地区石斑鱼年产量达到93 024万t，占全球养殖规模的45.57%。然而种质的退化、环境的污染以及超出环境容量的养殖密度导致石斑鱼病害频发，2021年广东水产养殖中有约50%的经济损失由病害造成。
石斑鱼最主要的养殖模式是海水网箱养殖，其次是池塘养殖和工厂化养殖。高密度、高污染的养殖过程中出现的富营养化造成水体中细菌群落结构与功能的变化，在海洋中广泛分布的弧菌已经成为海洋养殖的主要病原之一。部分病原性弧菌能跨物种感染，弧菌中的哈维氏弧菌正是能跨物种感染的病原弧菌之一。
哈维氏弧菌能感染鱼类、虾类和贝类，甚至能感染海马，患病动物源自天津、广东、海南等多地。在石斑鱼上，持续报道患病石斑鱼体内分离出哈维氏弧菌。而在斜带石斑鱼上，早在2004年，便有从患病斜带石斑鱼肝脏分离出哈维氏弧菌的报道，2021年又有斜带石斑鱼源哈维氏弧菌分离报道。哈维氏弧菌跨物种感染能力之强，地理分布之广，病害泛滥时间之久，都证明其作为病原对石斑鱼养殖的负面影响之大。
近期，湛江某养殖场斜带石斑鱼发病，出现鱼体体表发黑、溃烂现象，同时伴有白色隆起疥疮滋生。为研究其病因，笔者对该养殖场发病斜带石斑鱼进行致病菌分离、纯化，观察其形态特征。后通过分子技术和生理生化反应进一步对该分离菌株进行鉴定，确认其中优势株S1为哈维氏弧菌，并根据16SrRNA基因序列多序列比对结果以Neighbor-Joining法构建斜带石斑鱼源哈维氏弧菌S1的系统进化树，确认哈维氏弧菌S1的进化地位。同时绘制哈维氏弧菌S1的生长曲线，检测哈维氏弧菌S1的耐药性。以期为后续对哈维氏弧菌S1的深入研究提供基础，为探寻斜带石斑鱼养殖过程哈维氏弧菌防治提供参考。
1材料与方法
1.1试验材料
于湛江某养殖基地取样3条（5.52±0.20）cm，患病斜带石斑鱼分别标记为Ec1、Ec2、Ec3。一次性涂布棒、16S通用引物、微量细菌生化反应管（购自杭州滨和微生物试剂有限公司）、药敏纸片（购自杭州滨和微生物试剂有限公司）、TSA琼脂培养基、LB琼脂培养基、TCSB琼脂培养基、LB培养基、TSB培养基。
1.2试验方法
1.2.1鱼病诊断。对Ec1、Ec2、Ec3进行目检和剖检，将检查结果与健康斜带石斑鱼进行比较，记录病变组织和组织结构上的病理变化。
根据检查结果对病原进行初步判断。
1.2.2细菌分离与纯化。
对Ec1、Ec2、Ec3体表病灶（Sk）、肝脏（Li）、脾脏（Sp）3个出现病理变化的部位在TSA平板、LB平板、TCSB平板划线接种，接种平板于28℃培养箱中培养18h，观察平板上菌落的大小、颜色和形态并记录，挑取固体培养基上不同区域一定数量的单菌落于LB液体培养基，37℃摇床振荡培养12h。在菌液中添加等体积浓度为40%的灭菌甘油，于-80℃保存。
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