活体微生物制剂利用微生物在不同环境中的自我繁殖能力，在改善微生物群落结构、降低污染、提升土壤地力、促进作物生长和抗病能力等方面发挥着越来越重要的作用。
传统微生物环境耐受水平分析主要是通过平板分离获得对单克隆菌落数量的统计，或通过试管、摇瓶进行微生物培养，再根据菌体光密度分析其生长曲线。为了摸索简便可行的操作方法，研究人员采用96孔培养板培养微生物，以获得微生物对不同抗生素的耐受水平，或实现对功能菌株的高通量筛选，证实了96孔培养板对微生物进行微量培养的可行性和便利性。
微生物菌悬液的制备
细菌在LB培养基上划线纯化，挑取单菌落接入10 mL新鲜LB液体培养基中，30℃培养过夜，备用。链霉菌在ISP2固体培养基上28℃划线纯化，挑取单菌落转接新鲜ISP2培养皿28℃培养3～5 d，待孢子长好，用灭菌不锈钢称量勺轻轻刮取孢子于适量的含0.5%吐温-80的水溶液中悬浮，制成孢子悬浮液。
平板分离法检测菌株紫外线耐受水平
取1～2 mL菌悬液加入24孔培养板中，置于30 W、254 nm波长紫外线灯正下方30 cm处分别照射2、5、10、30 min，以未经紫外线照射的处理为对照，每个处理重复3次。取1～2 mL链霉菌孢子悬浮液加入24孔培养板中，在相同紫外线条件下分别照射10、30、60 min。将紫外线照射后的菌悬液按比例用无菌水稀释至合适浓度，并分别取100μL稀释样品涂布LB或ISP2平板，每个稀释样品重复涂布2个平板，细菌30℃培养48 h，链霉菌28℃培养72 h，统计菌落数。
酶标仪分光光度法检测菌株紫外线耐受水平
菌悬液或孢子悬浮液按1.2.2进行紫外线照射后，按2%(体积分数)的接种量接入预先添加200μL/孔LB或ISP2培养液的96孔培养板中，每个样品重复2次。以2%无菌水接种的培养液做空白对照。接种完成后在96孔板上贴上一层无菌专用封膜，再盖上96孔板盖，以避免孔内培养液在振荡过程中溅出互相污染。将96孔板放入微孔板恒温振荡器上，细菌30℃、500 r/min培养2、4、6、8 h，链霉菌28℃、500 r/min培养6、12、18、21、24、27 h，用酶标仪检测各培养液在600 nm的吸光度(OD600)，以时间为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制菌株生长曲线。
链霉菌Ahn30和TJA4经紫外线照射后的生长情况(酶标仪分光光度法)
酶标仪分光光度法检测细菌的pH耐受水平
将LB培养液用HCl或NaOH调整pH值分别为4、5、6、7、8、9。在96孔板中加入200μL不同pH值的LB液体，以2%的接种量接入培养过夜的菌悬液，贴上封膜，并盖上板盖，放入微孔板恒温震荡器上30℃，700 r/min培养2、4、6、8 h。分别以不同pH值的未接菌培养液做空白对照，每个pH重复6次。用酶标仪检测各培养液的OD600，并绘制菌株生长曲线。
酶标仪分光光度法检测细菌的盐耐受水平
配制含1%、3%、5%、7%、9%NaCl的LB培养液。按1.2.4的方法加入培养液和菌悬液并培养，分别以不同盐浓度的未接菌培养液做空白对照。用酶标仪检测各培养液的OD600，绘制不同盐浓度下菌株的生长曲线。
相关新闻推荐
1、橄榄苦苷体外抗氧化活性、抑菌活性分析及对细菌生长曲线的影响