在从芝麻菜中分离的菌株中,在对照培养物(不添加噬菌体)中,弗氏柠檬酸杆菌菌株KKP 3655最快开始对数生长期,持续10小时。在此期间,光密度增加了0.255。使用1.0的感染因子最有效地延迟了对数期的开始(12小时后),持续11小时30分钟,培养物的光密度增加了0.136。
在从胡萝卜混合叶沙拉中分离的菌株中,在对照培养物(不添加噬菌体)中,阴沟肠杆菌菌株KKP 3082最快开始对数生长期(3小时30分钟后),持续14小时30分钟。在此期间,光密度增加了0.312。使用1.0的感染因子最有效地延迟了对数期的开始(7小时45分钟后),持续14小时45分钟,光密度增加了0.147。在对照培养物(不添加噬菌体)中,路德维希肠杆菌菌株KKP 3083在1小时45分钟后开始对数生长期,持续17小时30分钟。在此期间,光密度增加了0.486。使用0.1的感染因子最有效地延迟了对数期的开始(6小时15分钟后),持续13小时15分钟,光密度增加了0.206。感染率为1.0的样品中对数生长期从5小时45分钟开始,持续16小时15分钟。在此期间,光密度增加了0.160。关于大肠杆菌菌株KKP 3824,在MOI 0.1时观察到比MOI 1.0时更低的比生长速率系数(分别为0.008和0.009)。这可能与噬菌体滴度略高以及噬菌体的裂解活性可能有关。
在从甜菜根混合叶沙拉中分离的菌株中,在柠檬酸杆菌属菌株KKP 581感染噬菌体的情况下,比生长速率系数从对照培养物的0.011增加到MOI 1.0样品的0.015,这可能表明细菌获得了对该噬菌体的抗性、溶原化或假溶原化现象。菌株群体附近过高的噬菌体浓度可能是一种应激因子,导致细胞分裂速率的激活和增加。对于MOI 0.1的感染率,噬菌体与对照培养物相比几乎将细胞分裂数量减少了两倍。在大多数菌株中,使用1.0的感染因子比使用较低的感染因子(MOI 0.1)对细菌宿主细胞分裂具有更强的抑制效果。大肠杆菌菌株KKP 3688、土生拉乌尔氏菌菌株KKP 3689和大肠杆菌菌株KKP 3705在MOI 0.1时比MOI 1.0时具有更低的比生长速率,类似于大肠杆菌菌株KKP 3824。将泉居沙雷氏菌菌株KKP 3084与MOI 1.0的互补噬菌体一起培养,比生长速率系数几乎降低了五倍,在MOI 0.1时比对照培养物降低了两倍多。在对照培养物(不添加噬菌体)中,泉居沙雷氏菌菌株KKP 3084在5小时30分钟后开始对数生长期,持续14小时30分钟。在此期间,光密度增加了0.464。使用MOI 1.0的感染因子加速了对数期的开始(1小时15分钟后),持续21小时15分钟,光密度增加了0.102。MOI 0.1样品中的对数生长期从2小时15分钟开始,持续13小时30分钟。在此期间,光密度增加了0.173。
使用Bioscreen C自动生长分析仪在噬菌体感染培养物中对数生长期的变化已被广泛研究。Zhao等人表明,无论感染水平如何,噬菌体处理的细菌培养物比对照培养物更晚开始对数期。Mahmoud等人进行的研究中,与对照培养物相比,MOI 1.0噬菌体感染的所有测试噬菌体都延迟了肯塔基沙门氏菌的生长。孵育24小时后,噬菌体完全抑制了宿主细菌菌株的生长。另一方面,在Yu等人进行的实验中,噬菌体感染培养物在长达24小时内显示比对照培养物更差的生长。在接下来的24小时内,一些培养物显示比对照培养物更强劲的生长,根据作者的说法,这源于获得细菌对测试噬菌体感染的抗性。Xu等人使用Bioscreen C自动生长分析仪评估双相混合物作为爱德华氏菌感染治疗策略。在其他研究中,Bioscreen C生长分析仪用于不同MOI(10⁻⁶、10⁻³、10⁻²和10⁻¹)下ValSw3-3噬菌体对溶藻弧菌的体外裂解测定。杀灭曲线表明,ValSw3-3对本研究中测试的所有MOI的宿主都非常有效,感染后前12小时几乎没有观察到细菌生长。一般来说,噬菌体感染后细菌的再繁殖意味着噬菌体抗性的出现,但在实验期间,感染后细菌群体的再生发生得相当缓慢。
3.5. 噬菌体混合物在分析RTE食品产品中的应用
在研究的最后阶段,测试了噬菌体混合物(由所有43种分离的细菌病毒组成)在减少测试食品产品中细菌数量方面的有效性(表6)。值得一提的是,所使用的噬菌体是针对来自其他生产批次的生菜中分离的细菌宿主。因此,只有当产品中存在与分离纯培养物的生产批次中相同的细菌菌株时,或者当噬菌体对不同物种(或菌株)的细菌宿主表现出广谱活性时,它们才能发挥作用。
在芝麻菜的48小时储存期间,对照样品中的细菌总数从8.47±0.11 log CFU g⁻¹稳步增加到11.49±0.13 log CFU g⁻¹。使用喷洒和吸收垫方法在6小时后显著减少了产品环境中微生物的生长。两种测试的应用方法对细菌生长的限制效果相似。48小时后,产品中的细菌总数分别为9.46±0.06 log CFU g⁻¹和9.52±0.08 log CFU g⁻¹。在储存期间,对照样品中的细菌总数增加了3个对数单位,而使用噬菌体混合物以直接喷洒或吸收垫形式应用,与对照样品相比减少了99%的细菌总数(减少2个对数单位)。
在胡萝卜混合叶沙拉的48小时储存期间,对照样品中的细菌总数增加了近3个对数单位,从8.00±0.03 log CFU g⁻¹增加到11.71±0.06 log CFU g⁻¹。使用喷洒和吸收垫在6小时后并未显著限制细菌生长,而48小时后产品环境中的细菌总数显著减少。吸收垫比喷洒更有效地减少了食品产品中细菌的生长(48小时后细菌总数分别为8.67±0.14 log CFU g⁻¹和9.07±0.34 log CFU g⁻¹)。在储存期间,噬菌体喷洒试验中的细菌总数增加了一个对数单位。在储存期间使用吸收垫几乎完全抑制了细菌生长(p < 0.05)。使用噬菌体混合物以直接喷洒或吸收垫形式应用,与对照样品相比减少了99.9%的细菌总数。
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