2.材料与方法
2.1.微生物
选择蜡样芽孢杆菌、单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌作为产芽孢革兰氏阳性菌、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的代表微生物。
蜡样芽孢杆菌INRA-AVTZ415由法国国家农业研究所（INRA,Avignon）kindly提供。单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌型菌株（分别为CECT 4031和CECT 515）由西班牙型菌种保藏中心（CECT）提供。
为了接种生长培养基，蜡样芽孢杆菌营养细胞在30°C下在脑心浸液肉汤（BHI;Scharlau Chemie S.A.,Barcelona,Spain）中培养，直至达到生长稳定期。单核细胞增生李斯特菌营养细胞在37°C下在补充了0.6%酵母提取物（YE;Scharlau Chemie）的胰蛋白酶大豆肉汤（TSB;Scharlau Chemie）中培养，直至达到生长稳定期。大肠杆菌营养细胞在37°C下在酸化至pH 5 with HCl（Panreac Química,Barcelona,Spain）的TSB+YE中培养，直至达到生长稳定期。选择这些生长条件作为这些微生物的有利条件。
2.2.光密度生长曲线
100孔微孔板填充400μL生长培养基（蜡样芽孢杆菌用BHI，单核细胞增生李斯特菌用TSB+YE，大肠杆菌用pH 5 TSB+YE），接种微生物并在Bioscreen C分析仪（Oy Growth Curves Ab Ltd.,Helsinki,Finland）中培养。生长培养基中的初始浓度对于蜡样芽孢杆菌为10¹,10²,10³,10⁴,10⁵和10⁶CFU mL⁻¹，对于单核细胞增生李斯特菌为10°,10°,10°,10°,10°和10°CFU mL⁻¹，对于大肠杆菌为10²,10⁴和10⁶CFU mL⁻¹。为了避免不同培养物生理状态差异引起的变异性，每种细菌的所有生长曲线均来自单一细菌培养物。生长培养基在30°C下培养蜡样芽孢杆菌，在37°C下培养单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌。每20分钟间隔，使用宽带滤波器（420-580 nm）测量样品的光密度（OD）。
对于每种微生物和初始浓度的组合，进行了25-30次重复，除了蜡样芽孢杆菌10¹和10²CFU mL⁻¹初始浓度，分别进行了13和21次重复，以及单核细胞增生李斯特菌10°,10°和10°CFU mL⁻¹初始浓度，各进行了5次重复。通过绘制OD对暴露时间的图获得生长曲线。通过吸光度测量生成了总共345条个体生长曲线。
2.3.平板计数生长曲线
50mL锥形瓶中的生长培养基接种微生物并在500 rpm振荡下培养。生长培养基和培养温度与光密度生长曲线使用的相同。生长培养基中的初始浓度对于蜡样芽孢杆菌为10¹,10³和10°CFU mL⁻¹，对于单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌为10²,10⁴和10⁶CFU mL⁻¹。在预设时间间隔，取样，在缓冲蛋白胨水（BPW,Scharlau Chemie）中适当稀释，并在BHI琼脂（BHIA,Scharlau Chemie）中于30°C培养24小时用于蜡样芽孢杆菌，在胰蛋白酶大豆琼脂（TSA,Scharlau Chemie）+YE中于37°C培养24小时用于单核细胞增生李斯特菌和大肠杆菌。生长曲线进行了重复。
通过绘制log CFU mL⁻¹对暴露时间的图获得生长曲线。
2.4.数学模型
使用五种初级生长模型分析生长曲线。这些生长模型基于线性（源自Monod模型）或非线性（Gompertz、Logistic、Richards和Baranyi）方程（表1），并重新参数化以反映Zwietering等[3]推导的微生物生长参数。
三相线性、Gompertz、logistic和Richards模型的曲线拟合使用Matlab 7.0（Math Works,Natick,USA）的曲线拟合工具进行，计算了生长参数的95%置信限（CL）以及拟合的r²、RMSE和平方和误差（SSE）。
Baranyi方程的曲线拟合使用DMFit 2.0程序进行，并使用了Baranyi和Roberts[23]的模型，由József Baranyi博士kindly提供。该程序提供了每个生长参数的标准误差以及拟合的r²和标准误差。利用这些值，计算了生长参数的95%CL和拟合的RMSE。
使用StatGraphics（StatPoint Technologies,Warrenton,USA）进行方差分析、中位数和箱线图四分位数计算。p值始终低于0.05。
表1：初级生长模型。
a y：时间t时的对数计数或吸光度；y0：初始对数计数或吸光度；μ：最大生长率；λ：延迟时间；tₛ：达到稳定生长阶段的时间；ymax：最终对数计数或吸光度；C：从y0到ymax的对数计数或吸光度增加；β：模型系数。
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