2 结果与分析
2.1 革兰氏染色形态学分析
据观察，W. cibaria BWL4的菌落形态呈现出中间凸起的光滑乳白色的小圆点。显微镜观察发现，菌体多以成对或单个短棒状出现，大小略有区别。
革兰氏阳性菌呈紫色或蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。W. cibaria BWL4的革兰氏染色结果显示，菌落呈现紫色，由此可判断W. cibaria BWL4为革兰氏阳性菌。
2.2 生长曲线及产酸曲线
W. cibaria BWL4的生长和产酸规律如图所示。从生长曲线可以看出，W. cibaria BWL4在接种2 h后进入对数生长期，在16 h后进入生长稳定期，48 h时的A₆₀₀值达到2.4左右。
从产酸曲线可以看出：当W. cibaria BWL4处于对数生长期时，培养基的pH值快速下降；处于生长稳定期时，其pH值也逐渐趋于稳定，pH值保持在3.9左右。
2.3 耐酸、耐胆盐性能分析
W. cibaria BWL4中加入不同浓度盐酸和不同体积分数牛胆盐时的生长情况如图所示。图中：1为对照组；2、3、4分别对应pH值为4.0、3.0、2.5；5、6、7分别对应加入体积分数为0.1%、0.2%、0.3%的牛胆盐。W. cibaria BWL4在不同pH值和牛胆盐体积分数下培养24 h时A₆₀₀值见表1所列。
表1 W. cibaria BWL4在不同pH值和（牛胆盐）时A₆₀₀值
组别 pH值 牛胆盐体积分数/%
对照 2.5 3.0 4.0 0.1 0.2 0.3
测定1 2.313 0.087 0.476 1.759 1.280 0.713 0.098
测定2 2.309 0.079 0.482 1.818 1.302 0.737 0.097
测定3 2.318 0.083 0.473 1.798 1.296 0.725 0.098
由表1可知：与对照组比较，W. cibaria BWL4在不同pH值下生长均受到抑制，在pH值为4.0时，其A₆₀₀为1.792左右，这与已报道的植物乳杆菌C182、肠系膜明串菌株C10、F27、C4在培养基pH值为4.0时A₆₀₀均不超过1.4相比较，其耐受能力最好；当pH值为3.0时，植物乳杆菌C182、肠系膜明串菌株C4、F27的生长状况不及W. cibaria BWL4菌株，说明W. cibaria BWL4的耐酸性能更好；当pH值为2.5时，菌株几乎无法生长，说明W. cibaria BWL4不能耐受此酸性环境。
从图表可以看出，W. cibaria BWL4耐胆盐性能与耐酸性能相似，在不同体积分数牛胆盐条件下均受到抑制，当牛胆盐体积分数为0.1%时，W. cibaria BWL4生长良好，在0.3%的牛胆盐条件下，W. cibaria BWL4无法耐受此胆盐环境。
2.4 抗真菌谱分析
本文通过平板对峙实验，发现W. cibaria BWL4对黄曲霉菌、扩展青霉菌、灰霉菌及镰刀菌均有抑制作用，其中菌株对灰霉菌的抑制效果最佳，对镰刀菌的抑制最弱。
2.5 抑细菌谱分析
W. cibaria BWL4的无菌上清液对大肠杆菌、单核细胞增生李斯特菌、丙二酸盐克罗诺362、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制效果。
上清原液、pH值7.0的W. cibaria BWL4上清液和W. cibaria BWL4上清液。将上清液的pH值调到中性条件和单纯的MRS培养基均无抑菌作用。
不同处理方式对指示菌的作用效果见表2所列。从表2可以看出，上清原液对单核细胞增生李斯特菌的抑制效果最好，对沙门氏菌的效果相对较差。
表2 W. cibaria BWL4对指示菌的抑制作用
处理方式 大肠杆菌 单核细胞增生李斯特菌 丙二酸盐克罗诺362 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌
上清液 +++ ++++ ++++ ++ +++
pH值7.0上清液 NE NE NE NE NE
MRS培养基 NE NE NE NE NE
注：NE表示无抑制作用；+表示抑菌圈直径7~<11 mm；++表示抑菌圈直径11~<14 mm；+++表示抑菌圈直径14~<17 mm；++++表示抑菌圈直径17~20 mm。
3 结 论
本实验通过W. cibaria BWL4对真菌的平板对峙方法发现，W. cibaria BWL4对黄曲霉菌、灰霉菌、扩展青霉菌和镰刀菌均能产生显著的抑制作用，这与已报道的结果一致。本研究通过牛津杯实验发现W. cibaria BWL4的细胞上清液对大肠杆菌、单核细胞增生李斯特菌、丙二酸盐克罗诺362、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制效果，相较于已报道的植物乳杆菌DY-6的抑菌效果更为显著。因此本文推测W. cibaria BWL4的细胞上清液中含有能够破坏致病菌细胞完整性的活性物质，后续实验将会通过多种方式来提取这些活性物质，例如乳酸菌可以通过产生挥发性物质来抑制病原真菌。因此后续将通过研究GC-MS检测其产生的具有拮抗作用的挥发性物质成分，进一步完善W. cibaria BWL4的抑菌机理。
本实验经分离纯化出食窦魏斯氏菌W. cibaria BWL4，通过对其系统发育树和生长曲线的研究以及对其耐酸、耐胆盐的性能分析，了解了W. cibaria BWL4的基本生物学特性，并采用平板对峙与牛津杯的实验方法探究W. cibaria BWL4的抑菌谱特性，为其对病原菌的抑制机理提供了重要信息，有助于进一步研究其对抑制各类致病菌代谢机制。
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