高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome,HP-PRRS),俗称“高致病性猪蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)变异株引起的一种急性高致死性传染病。HP-PRRSV与PRRSV间最主要的差异是HP-PRRSV在NSP2蛋白中存在30个氨基酸的缺失,临床主要表现体温高、发病率高和死亡率高”三高”特点,自2006年以来HP-PRRS给我国养猪业带来了巨大损失。


该病无特效治疗药物,主要靠疫苗接种来预防控制。我国用于预防HP-PRRS的疫苗,活疫苗占75%,主要由于活疫苗具有免疫力坚强、疫苗免疫产生期快、免疫效果好、免疫期长等优点。病毒含量和免疫原性是活疫苗的主要指标,我国兽用疫苗行业主要以转瓶培养方式生产疫苗,批次间差异大,疫苗质量不稳定是疫苗厂家共性问题,要保证疫苗质量稳定,必须进行疫苗生产工艺优化,本研究主要通过筛选并建立种子库,优化Marc-145细胞培养条件,优化Marc-145细胞微载体培养对高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗生产工艺进行研究。力求优化工艺,为其它产品工艺提供有效参考。通过细胞传代、接毒、效力测定等实验,筛选出适应性好的细胞株及种毒,成功建立了细胞库、种毒库,冻存种细胞18株、种毒15株,经鉴别鉴定后安全性和纯净性良好,回归实验显示种细胞和种毒的优势有可复制性,达到筛选和建库的目的,为生产工艺优化奠定了基础。


通过比对试验、正交实验,分析各因素对转瓶培养工艺的影响,证明DMEM(高糖)、含8%-10%FBS的生长液更适合Marc-145细胞生长,转速10次/h、温度37.5℃、2%FBS维持液、Ph7.3的方案更适合病毒增殖。在适当范围调节生产方案使生产更稳定,优化效果明显。利用生物反应器,通过微载体培养技术,成功的进行了Marc-145培养和接毒,结果显示最佳细胞接种密度为2.6×10~5/ml,微载体培养细胞密度比转瓶培养高2.1倍,产毒滴度比转瓶培养高0.46,为大规模生产技术升级提供了基础数据。

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