本实验将以上两组不同的血清对Sp2/0—Ag14细胞进行培养,通过测定细胞在培养过程中的生长曲线,得出细胞在不同时期的生长密度并以此为依据来判断不同血清培养的细胞生长效果。


生长曲线包括三个时期:滞留期:此期为分种后的初期,不分裂繁殖,细胞数目不增加,甚至略减,一般需24~96小时,指数期:这是细胞繁殖的旺盛期,一般为3~5天有时也把它叫潜伏期,平台期:此时细胞已达饱和浓度,停止生长繁殖,要及时分种传代,否则将逐渐衰亡[2]。


在测定细胞生长曲线的同时,取细胞达到最大浓度前的细胞数与达到这一数量所需的时间计算出细胞的倍增时间[3],这种方法相对于细胞计数法[4]来说,能有效的减少实验误差对实验结果的影响,从而使获得的数据更加客观,可靠。


细胞倍增时间法


细胞倍增时间的测定:按生长曲线计算细胞的倍增时间。取细胞峰值前一天计的得数(Y),接种细胞数(X),及生长时间(T)计算。


倍增时间=T/A A=log2Y/X[6]


步骤


将3%谷氨酰胺和1.1%丙酮酸钠按1%比例加入RPMI 1640培养液中,用7.5%碳酸氢钠调培养液的PH值为7.2-7.4。取Sp2/0-Ag14种细胞一瓶,用弯头吸管反复吹打培养瓶细胞面,制成细胞悬液,分种到两个100ml培养瓶中,9ml培养液/瓶,分别加入两组牛血清(10%)1ml,放入5%二氧化碳恒温培养箱拧松瓶盖进行开放式培养,对细胞进行计数,待细胞浓度达到104/ml时将细胞接种至96孔板中,每隔24h计数一次,连续计数一周,纪录实验数据[5]。细胞的最大增值浓度不低于106/ml。将记录的实验数据汇总,绘制出细胞生长曲线,根据公式计算出细胞倍增时间。

Sp2/0-Ag14细胞生长曲线图

采用细胞生长曲线测定法,虽然也要进行细胞计数,但细胞生长曲线的测定是对细胞生长趋势的测定,实验产生的误差对实验结果的影响较小,从而使结果更加客观,精确。实验结果证明:采用14日龄采血牛血清进行细胞培养优于采用3月龄血清;采用细胞倍增时间法进行细胞培养效果评价要优于细胞计数法。

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