牛A群轮状病毒(Bovine Rotavirus A，BRVA)是新生犊牛急性腹泻的主要病原之一，给养牛业的带来了巨大的损失。目前预防牛轮状病毒的主要策略是通过给怀孕母牛接种疫苗，将母源抗体传递给新生犊牛产生被动免疫，但目前我国目前尚无商品化的疫苗。
本研究的目的是研究我国牛A群轮状病毒优势分离株SDA2毒株对小鼠的免疫原性，为国内犊牛腹泻防治提供技术支持。
本研究取得的主要结果如下:
1、SDA2毒株培养条件的优化
牛A群轮状病毒的基因型有很多，但同型毒株对异型毒株不能产生有效的保护作用，前期的流行病学资料表明G6P1型牛轮状病毒是我国优势的基因型。本实验的目的是对本实验室分离纯化的G6P1型轮状病毒SDA2毒株的培养的细胞系进行筛选、病毒接种量及收毒时间进行优化，从而提高病毒的产量。结果在其他培养相同条件下培养19 h后，SDA2在Vero细胞培养物中的CT值为34.214±0.557，在MA104中的CT值为15.121±1.219，表明SDA2毒株在MA104细胞上增殖效率显著高于Vero细胞。在25 cm细胞瓶中用400μL、600μL、800μL、1000μL四个病毒接种量分别接种MA104细胞，孵育1 h后弃去病毒液加入5 mL维持液，培养19 h后收集病毒液，采用荧光定量RT-PCR进行定量，四个接种量细胞培养物中病毒荷载量分别为2.39×10、2.39×10、2.39×10、2.39×10，结果表明接种800μL(8×10TCID)病毒液为最佳。采用荧光定量RT-PCR分别对MA104细胞上接种SDA2后10个时间点(4、8、12、16、20、24、28、32、36和40 h)的细胞培养物中病毒进行定量，并绘制病毒的一步生长曲线。
结果显示接种后第4～28h病毒荷载量较少，随后病毒荷载量缓慢增加，第28 h病毒开始大量增殖，36 h达到峰值，病毒荷载量为2.39×10，36～40h病毒荷载量维持稳定变化不大。根据本研究数据，病毒接种后36小时病毒荷载量达到最大，为后续疫苗研制作中抗原生产提供了可靠依据。
2、G6P1牛轮状病毒灭活疫苗对小鼠免疫原性的研究将病毒滴度测定
为10TCID/0.1mL的病毒液用β-丙内酯灭活，采用201佐剂乳化制成灭活疫苗，按0.2mL/只、0.5mL/只、1.0mL/只的剂量进行分组接种小鼠，一免后间隔14 d以相同的剂量加强免疫，二免后每隔7天眼底静脉采血至42 d，对6个时间点的小鼠血清抗体进行监测。本实验将0.5mL组二免28天的小鼠血清稀释成6份待检血清，分别进行中和试验和间接ELISA检测，进行相关性验证并利用SPSS软件建立线性方程，结果两者之间相关性系数为0.997，说明中和试验结果与ELISA检测结果有着显著的相关性，间接ELISA可用来代替中和试验对小鼠血清抗体进行检测，并且中和试验测得0.5mL组小鼠二免28天中和抗体效价为1:3556，表明本实验的疫苗可以产生较高水平的中和抗体。
用间接ELISA对二免后小鼠抗BRVA抗体进行检测，结果显示二免后7d、14d、21d、28d、35d、42d，0.2mL组小鼠血清抗体效价分别为1:348±49.05、1:540±45.03、1:1440±50.70、1:1872±72.72、1:1535±58.66、1:981±54.18，0.5mL组小鼠血清抗体效价分别为1:680±52.47、1:1672±58.90、1:2860±63.75、1:3556±61.72、1:3926±63.35、1:2142±63.65，1.0mL组小鼠血清抗体效价分别为1:524±47.59、1:1492±50.16、1:2750±61.16、1:3672±100.44、1:4018±66.99、1:2251±88.93。
结果显示，0.2 mL组血清抗体水平明显低于其它两组，血清抗体在第28d达到峰值1:1872±72.72;0.5mL组小鼠和1.0 mL组小鼠血清抗体水平从7d到35d上升，并且在第35d达到峰值分别为1:3926±63.35和1:4018±66.99，0.5 mL组在第二次免疫后7 d到21 d抗体水平略高于1.0 mL，28d到35d两组抗体水平逐步持平，结果表明抗原含量对抗体水平有影响，在一定范围内抗体水平随抗原量的增加而上升，该结果还表明在小鼠上的最佳剂量为0.5 mL/只。
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