细菌广泛分布于我们的生活环境中,是空气和水中的微生物指标之一。空气中的细菌总数是指1m3空气中各种细菌的总数目。水中的细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中,于37℃经24h培养后所生长的细菌菌落总数。一般认为每1ml水中细菌总数小于100个为极清洁的水,100~1000个为清洁水,1000~10000个为不太清洁水,10000个以上即为不清洁水。人们饮用了不清洁的水可产生各种疾病,如:细菌性痢疾、霍乱沙门氏菌病等。


1材料与方法


1.1实验器材


培养皿(直径90~100mm),500ml大烧杯,100℃温度计,500ml三角瓶,高压蒸汽灭菌锅,恒温生化培养箱,放大镜。


1.2培养基的配方


蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1000ml。


2总结与讨论


2.1实验过程


培养基在配制时各种配方称好后混于水中,经过加热熔化,熔化过程中要不断搅拌使各成分均匀混于水中,并在加热同时不断补充失去的水分,以补足至原来的体积。否则培养基各成份混合不均匀,水分不足,培养基营养不全,不利于细菌生长。配制好的培养基若有沉渣或混浊,趁热用三至四层纱布过滤,滤液最好用pH计调节pH值为7.2~7.4,过酸或过碱都不利于细菌生长,并在2h内灭菌。灭菌的高压锅最好是单独使用放于无菌室中,灭菌好的培养基可于高压锅中存放1~2h;待无菌室灭菌后,再打开高压锅取出备用,以达到备用培养基绝对无菌。


2.2无菌室的灭菌


一般要求只要打开无菌室的紫外灯20min后,无菌室就可以达到无菌,但经过实验验证无法达到要求,细菌空白对照实验如表1所示。

表1空白对照实验


从4组细菌空白实验可以看出无菌室达到真正无菌只要打开无菌室紫外灯30min后,再打开无菌操作台的风机预热20min后进行水样细菌接种实验,这样就可得到相对准确的细菌总数分析结果。这一结果是紫外灯更换90d左右所得。但紫外灯使用1a以上,接近1.5a,开紫外灯30min后,再预热无菌操作台20min后进行空白实验,不能达到无菌室真正无菌的要求,建议紫外灯1a更换1次。


2.3培养基的温度


水样接种时,培养基的温度非常关键,温度高了容易把水样中的细菌烫死,温度低了一方面琼脂培养基容易凝固(尤其在冬季),另一方面水样与培养基混合不均匀,培养出的菌落分不开,成团生长,不易计数。培养基的温度在40~45℃左右最佳,接种时最好用温度计控制温度,建议在无菌室放一个电炉,温度达不到时,以便加热使温度保持在一定范围内,也可用热水浴保持培养基的温度。


3结论


试验表明,要准确掌握水样中的细菌总数,关键是细菌的培养。细菌培养的前提不仅有配制良好且无菌培养基,真正无菌的接种室,而且要有接种时培养基适宜的温度。


相关新闻推荐

1、开发液滴微流控平台实现蜜蜂肠道微生物单细胞高通量培养

2、环境微生物学的发展历程

3、2型糖尿病db/db小鼠血管内皮细胞培养与生长曲线检测

4、鲁氏酵母重组菌株生长曲线的测定及基因编辑系统构建

5、芝麻香型白酒关键微生物产香分析研究