从附录图4可以看出，毒物兴奋效应在18到24小时间逐渐增强，最大刺激从39%增加到74%。此外，当SM浓度超过2.24x10⁻⁵ mol/L（LogC: -4.65）时，抑制效应进一步增强。根据费氏弧菌的生长曲线（图2），生物发光的下降和细菌密度的稳定表明C6的浓度下降，而C8的浓度保持稳定。此时，低剂量SM可能进入细胞质并激活LuxR蛋白的表达，使C8与LuxR结合以增加生物发光。
其他SAs在Dhps中的对接结果见附录图3，并观察到类似的受体-配体相互作用。结果表明SAs可以竞争性地结合Dhps并减少Dhps-PABA复合物的数量。另外五种SAs（SDX, SMX, SPY, SCP, SMR）在0到24小时内对费氏弧菌生物发光的毒物兴奋效应如附录图5-9所示；它们表现出与SM相似的行为，表明SAs对费氏弧菌的时间依赖性毒物兴奋效应是这些药物的共同属性。
3.3. B3O对费氏弧菌的时间依赖性毒物兴奋效应
图5. C6(A)、C8(B)及B3O(C)与LuxR蛋白对接时的配体相互作用示意图。蓝色虚线与黄色实线分别表示配体与氨基酸残基之间的氢键及π-π键。
附录图4(B)显示了B3O在0到24小时内对费氏弧菌生物发光的个体效应。此效应可分为四个阶段，图3(B)显示了B3O在0、4、10、18和24小时对费氏弧菌的毒物兴奋效应。第一阶段从0到2小时，其特征是随着B3O的添加，抑制效应增加。由于呋喃酮B3O和C6信号分子具有相似的脂溶性和水溶性，它们在LuxR中具有相同的结合位点，这些分子的对接视图如图5所示。可以看出，两个氢...LuxR-B3O > LuxR-C6。B3O能够快速进入细胞并与LuxR蛋白的残基结合（图5A）；然而，对于B3O（图5C），除了氢键外，B3O的苯环和Tyr-65残基之间还存在pi-pi相互作用。这些观察结果为受体-配体稳定性顺序提供了证据：LuxR-B3O > LuxR-C6。B3O能够快速进入细胞，并通过竞争性地结合LuxR蛋白从而破坏费氏弧菌中luxICDABEG基因的表达，导致抑制作用。
时间依赖性毒物兴奋效应的第二阶段发生在3到6小时间，并表现出明显的毒物兴奋效应。引起刺激所需的浓度相对较低，效果范围从2.23x10⁻⁴ 到 9.63x10⁻⁴ mol/L（LogC：从-3.65到-3.02），在5小时时最大刺激达到254.18%。根据费氏弧菌的生长曲线，HV值持续下降而OD值逐渐增加，这表明C6和LuxR蛋白浓度低，而C8和AinR浓度高。分子对接可用于解释此期间的强烈刺激。C8和B3O在LuxR蛋白结合位点的对接视图如图5所示。可以看出，C8和ARG-62残基之间只形成一个氢键（图5B）。对于B3O（图5C），除了氢键外，B3O的苯环和Tyr-65残基之间还形成了另一个pi-pi相互作用，这使得可以确定受体-配体稳定性顺序：LuxR-B3O > LuxR-C8。类似地，我们推测复合物稳定性顺序如下：AinR-B3O > AinR-C8。在渗透到细菌内后，B3O首先与AinR蛋白结合。然后，C8可以与LuxR结合形成LuxR-C8复合物，该复合物编码发光基因的正调节因子并促进发光。高浓度B3O引起的抑制是由于多余的B3O与LuxR结合的结果。
第三阶段（7-16小时）的特点是，当存在低浓度B3O时，刺激效应几乎消失，并且随着暴露时间的增加，抑制效应减弱。当费氏弧菌的生长进入指数期时，C6、C8、LuxR和AinS的浓度急剧增加。由于B3O首先与AinR结合，然后与LuxR结合，由于AinR数量的增加，B3O在低浓度下产生还原性抑制效应。当B3O浓度高时，它可以完全结合AinR，剩余部分将与LuxR相互作用以抑制生物发光。
第四阶段包括从17到24小时的暴露时间，在附录图4(B)中可以观察到明显的时间依赖性毒物兴奋效应。B3O对生物发光的刺激作用随着暴露时间的增加而增强。具体而言，在17小时时，刺激浓度范围从2.23x10⁻⁴ 到 6.04x10⁻⁴ mol/L（LogC：从-3.65到-3.22），在24小时时，从2.23x10⁻⁴ 到 9.63x10⁻⁴ mol/L（LogC：从-3.65到-3.02），最大刺激从44.40%增加到153.85%。在此期间，细菌生长进入稳定期，生物发光开始下降。相反，OD值继续增加。此时，C6浓度下降，而LuxR和AinR蛋白均大量表达。因此，毒物兴奋效应的机制类似于第二阶段（3-6小时）发生的机制。
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