3.结果与讨论
3.1.分离株的分离与鉴定
婴儿粪便中的LAB计数范围从4 x 10^6 CFU/g到2 x 10^10 CFU/g，并且在配方奶喂养的婴儿中更高。共回收了109株LAB分离株，即82株来自母乳喂养，9株来自配方奶喂养，18株来自混合喂养。根据其RAPD-PCR谱对分离株进行区分，随后通过几个基因（16S、cpn60、pheS和/或sodA）的测序进行物种鉴定。因此，鉴定出60种不同的RAPD指纹谱，并分配了一个基因型（表2）。
从109株LAB分离株中，乳酸杆菌属是最主要的属，占分离株的48%。鉴定出的乳酸杆菌物种是加氏乳酸杆菌（21%）、类干酪乳酸杆菌/副干酪乳酸杆菌（10%）、发酵乳酸杆菌（9%）、鼠李糖乳酸杆菌（5%）、口乳酸杆菌（2%）和阴道乳酸杆菌（1%）。还检测到肠球菌属、链球菌属和魏斯氏菌属的成员（分别为38%、11%和3%），包括粪肠球菌（所有肠球菌分离株）、巴氏链球菌（5%）、唾液链球菌（3%）、卢特链球菌（2%）、解没食子酸链球菌（2%）和类肠膜魏斯氏菌（3%）（表2）。其他作者显示粪肠球菌是从1天大的新生儿粪便中分离的主要物种。
| 物种 | 喂养类型 母乳 | 配方奶 | 混合 | 总基因型数 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| n | 基因型 | n | 基因型 | n | 基因型 | ||
| 加氏乳酸杆菌 | 19 | 6 | 1 | 1 | 0 | 0 | 8 |
| 类干酪/副干酪乳酸杆菌 | 11 | 6 | 2 | 2 | 3 | 1 | 6 |
| 发酵乳酸杆菌 | 0 | 0 | 0 | 0 | 8 | 4 | 4 |
| 鼠李糖乳酸杆菌 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 | 1 | 3 |
| 口乳酸杆菌 | 2 | 1 | 1 | 1 | 2 | 0 | 1 |
| 阴道乳酸杆菌 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 |
| 粪肠球菌 | 35 | 23 | 2 | 2 | 4 | 2 | 27 |
| 巴氏链球菌 | 4 | 3 | 0 | 0 | 1 | 1 | 3 |
| 唾液链球菌 | 1 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| 卢特链球菌 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 | 1 | 2 |
| 解没食子酸链球菌 | 1 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 |
| 类肠膜魏斯氏菌 | 2 | 1 | 0 | 0 | 1 | 1 | 3 |
在乳酸杆菌中，加氏乳酸杆菌是出生后头2个月最常分离的物种（30%），其次是发酵乳酸杆菌、类干酪乳酸杆菌/副干酪乳酸杆菌和口乳酸杆菌（分别为9%、3%和3%）。然而，在2个月以上年龄，类干酪乳酸杆菌/副干酪乳酸杆菌占主导地位（25%），其次是发酵乳酸杆菌、鼠李糖乳酸杆菌和阴道乳酸杆菌（分别为25%、11%、8%和3%）。加氏乳酸杆菌在女性阴道微生物群中很常见（Vasquez等人，2002），并且在分娩期间观察到阴道乳酸杆菌可能定植新生儿（Matsumiya等人，2002）。此外，鉴于大多数采样的粪便来自母乳喂养的婴儿，并且在该组中加氏乳酸杆菌是最主要的乳酸杆菌物种，母乳可能是加氏乳酸杆菌的另一个来源。在这方面，Martin等人进行的一项研究显示，从母乳和婴儿粪便中分离出具有相同RAPD-PCR模式的加氏乳酸杆菌。与我们的结果一致，Xanthopoulos等人从婴儿粪便中分离出副干酪乳酸杆菌亚种副干酪乳酸杆菌、鼠李糖乳酸杆菌和加氏乳酸杆菌。Solis等人发现加氏乳酸杆菌是从10到90天龄新生儿粪便中分离的乳酸杆菌中的主要物种。同样，Ahrne等人报道鼠李糖乳酸杆菌和加氏乳酸杆菌是出生后头2个月粪便中最常分离的物种。
3.2.潜在益生菌菌株的技术和安全表征
进一步表征以筛选用于发酵香肠的潜在益生菌培养物，重点关注不同的乳酸杆菌菌株（n=23），因为它是所有分离株中在发酵香肠中最具技术相关性的属。人类LAB分离株已被测试其作为斯堪的纳维亚型发酵香肠（Klingberg等人，2005）和伊比利亚干发酵香肠（Ruiz-Moyano等人，2008）益生菌培养物的适用性。据报道，肠道来源是选择益生菌菌株的相关标准，因为它们可能预期在与其原始分离环境相似的环境中功能更好（Saarela等人，2000）。然而，在益生菌选择中也应考虑技术方面，如性能和存活能力以纳入肉制品，因为它们应能够与内生肉微生物群竞争（De Vuyst等人，2008）。因此，在补充了用于制作发酵香肠的不同成分和添加剂的MRS肉汤中进行的Bioscreen C生长测定显示，大多数测试的23株乳酸杆菌菌株能够在37°C下在MRS-c和MRS-Nit中生长，但只有18株能够在37°C下在MRS-Salt中生长，尽管与MRS-c和MRS-Nit相比，生长速率和检测时间（TTD）通常分别降低和增加（图1）。
图1：乳酸菌菌株在37°C下于MRS-c、MRS-Nit和MRS-Salt中的生长速率和检测时间。NG：无生长。
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