结果
1 温度对VNP20009生长的影响
如图1A所示，在42 ℃时，VNP20009的生长与37 ℃时相比没有显著性差异；在45 ℃时，其生长显著减缓。
为进一步评价不同温度下VNP20009的生长，统计了不同温度下VNP20009的菌落形成情况（图1B）并分析了温度对细菌存活的影响（图1C、D）。在42 ℃时，细菌存活率为85.6%，当暴露于45 ℃时，存活率为0。
通过评估细菌细胞在玻璃管上的黏附性来检测生物膜的形成，当在玻璃管中进行细菌培养时，会在气液交界形成一圈生物膜，通过结晶紫染色可使其显现。如图1E所示，随着温度的升高，细菌生物膜的形成量逐渐减少，与37 ℃组相比存在显著差异（图1F）。
图1 不同温度下VNP20009的生长与生物膜形成情况。A：VNP20009在600 nm波长下的生长曲线；B：不同温度下的菌落耐受性；C：42℃条件下VNP20009的存活率；D：45℃条件下VNP20009的存活率。n=5，均值±平均标准误（SEM）。菌落形成单位（CFU）是微生物学中用于估算样品中存活细菌或真菌数量的单位；E：采用玻璃试管结晶紫（CV）染色法测定不同温度下VNP20009的生物膜形成；F：使用ImageJ软件定量生物膜含量。n=3，均值±SEM。*与37℃组相比P < 0.05，P < 0.01，**P < 0.0001。
2 pH值对VNP20009生长的影响
在37 ℃条件下，考察pH值对VNP20009生长的影响。结果显示（图2A），在pH 6.5～8.5内，VNP20009的生长没有明显差异。但在pH 5.0条件下，VNP20009生长慢于对照组（pH 7.0），表明VNP20009的生长受到抑制。
在不同pH条件下，VNP20009的存活率受到影响。当pH值为5时，细菌存活率为70.7%；pH值为6.5时，细菌存活率85.6%。而pH值增大到8.5时，细菌存活率与对照组没有显著性差异，但菌落面积减小（图2B～E）。
pH值是细菌生物膜形成的一个重要影响因素。如图2F所示，pH 7.0时能形成较多的生物膜，但在pH 5.0时，生物膜形成量达到最大，pH 8.5时，生物膜形成量减少，两者均与pH 7.0时的形成量存在显著差异（图2G）。
图2 不同pH值下VNP20009的生长与生物膜形成情况。A：VNP20009在600 nm波长下的生长曲线；B：不同pH值下的菌落耐受性；C-E：不同pH值下VNP20009的存活率。n=5，均值±SEM；F：采用玻璃试管结晶紫染色法测定不同pH值下VNP20009的生物膜形成；G：使用ImageJ软件定量生物膜含量。n=3，均值±SEM。*与pH 7.0组相比P < 0.05，P < 0.01，**P < 0.0001。ns：无显著差异
3 H₂O₂对VNP20009生长的影响
本文同时探究了过氧化条件对VNP20009的生长影响。结果表明（图3A），H₂O₂对VNP20009的生长有影响。随着H₂O₂浓度的增加（1.5～2.5 mmol·L⁻¹），VNP20009的生长逐渐减缓直至完全不生长（5 mmol·L⁻¹）。VNP20009可在低浓度H₂O₂（1 mmol·L⁻¹）条件下存活，生长没有影响。
如图3B所示，在不同浓度H₂O₂下，VNP20009的生长受到不同程度的抑制。随着H₂O₂浓度的增加，细菌存活率逐渐下降（图3C）。添加1～2 mmol·L⁻¹ H₂O₂时，细菌存活率从53.9%下降至12.6%，当H₂O₂浓度达到2.5 mmol·L⁻¹时，细菌存活率为0。
H₂O₂处理后，细菌生物膜形成量与生长表现出一致的趋势（图3D、E），1 mmol·L⁻¹ H₂O₂对生物膜形成影响并不显著，当含量为1.5 mmol·L⁻¹时出现了显著性差异，持续增加H₂O₂含量，则完全不生成生物膜。
图3 不同过氧化氢浓度下VNP20009的生长与生物膜形成情况。A：VNP20009在600 nm波长下的生长曲线；B：不同过氧化氢浓度下的菌落耐受性；C：不同过氧化氢浓度下VNP20009的存活率。n=5，均值±SEM；D：采用玻璃试管结晶紫染色法测定不同过氧化氢浓度下VNP20009的生物膜形成；E：使用ImageJ软件定量生物膜含量。n=3，均值±SEM。与0 mmol·L-1组相比P < 0.05，P < 0.01，P < 0.001，P < 0.0001
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