2.2不同培养条件对嗜水气单胞菌GZ1株生长的影响
2.2.1温度对GZ1株生长的影响
由图3可知，除28℃与30℃两组外，其他各温度组间GZ1株生长差异显著（P＜0.05），4℃时GZ1株几乎不生长，在25～37℃生长良好，菌液浓度较高，而在25℃时生长最好，菌液浓度最高，达到18.73×108cfu/mL。
图3温度对嗜水气单胞菌GZ1株生长的影响
2.2.2 pH对GZ1株生长的影响
由图4可知，pH在5.5～8.0之间对GZ1株生长影响不同，在pH6.0、7.0间生长差异不显著（P＞0.05），其他pH生长差异显著（P＜0.05），pH6.5时菌液浓度最高（20.11×108cfu/mL），pH8.0时菌液浓度最低（10.60×108cfu/mL）。
图4 pH对嗜水气单胞菌GZ1株生长的影响
2.2.3 NaCl浓度对GZ1株生长的影响
由图5可知，NaCL浓度为0%～5%对GZ1株生长的影响差异显著（P＜0.05），NaCL浓度为0%和5%时，该菌几乎不生长，而NaCl浓度为2%时，细菌生长最好，菌液浓度最高，为31.61×108cfu/mL。
图5 NaCL浓度对嗜水气单胞菌GZ1株的影响
2.2.4 Mg2+对GZ1株生长的影响
由图6可知，不同浓度Mg2+对GZ1株生长影响差异显著（P＜0.05），Mg2+浓度为2.5 mg/L时,细菌浓度最高,为30.43×108cfu/mL，Mg2+浓度过高，细菌浓度反而降低，说明细菌浓度不随Mg2+浓度高而增加。
图6 Mg2+浓度对嗜水气单胞菌GZ1株生长的影响
2.2.5碳源对GZ1株生长的影响
由表2可知，碳源影响GZ1株的生长，以碳酸钠和柠檬酸为碳源时，几乎不生长，菌液浓度最低，仅为0.52×108cfu/mL左右，而碳源为蔗糖时，菌液浓度最高（9.85×108cfu/mL），说明蔗糖适合作为该菌碳源。
表2碳源对嗜水气单胞菌生长的影响
2.2.6氮源对GZ1株生长的影响
由表3可知，以蛋白胨和胰蛋白胨为氮源时，GZ1株生长良好，氮源为蛋白胨时，菌液浓度最高，而氮源为尿素和氯化铵时，GZ1株几乎不生长，这说明氮源影响GZ1株的生长。
表3氮源对嗜水气单胞菌生长的影响
2.2.7正交试验结果
由表4可知，4个考察因素中，温度对该菌生长影响最大，Mg2+浓度次之，pH影响最小，最优组合是A2B2C2D2，即25℃、pH 6.5、2%的NaCl和2.5mg/L的Mg2+。
表4正交实验结果
3讨论
嗜水气单胞菌可引起多种动物败血症，特别是水产养殖动物。用抗生素药物防治嗜水气单胞菌病易产生耐药性，疫苗免疫是防控嗜水气单胞菌病的主要手段，而要获得免疫原性好的嗜水气单胞菌，在大规模生产菌体过程中须充分利用其生长繁殖规律。研究表明，处于对数增长期的细菌酶活性高、繁殖率高和致病性强，而被用于灭活疫苗的研发。
本研究采用分光光度计测定不同培养条件下嗜水气单胞菌菌液的OD，探究不同培养条件对嗜水气单胞菌GZ1株生长的影响。结果显示，GZ1株的最适合生长温度为25℃，这与Miyata等的报道一致，但与Huys等报道不一致，这可能是由于各地菌株存在着差异，因而生理生化试验结果也存在着差异。pH影响细菌，改变细胞膜上的电荷，从而影响细菌对营养物质的吸收和酶活性；多数病原菌的最适合pH为中性或弱碱性环境中生长，本次研究结果显示：该菌的最适生长pH为6.5的弱酸性环境。有资料显示：初始pH为7.0的培养基，接种嗜水气单胞菌培养后，再测发现培养基pH降低，提示嗜水气单胞菌生长繁殖可以产酸；于华等研究发现：产酸芽孢杆菌的最适生长pH为5.5，孙鹏飞等研究表明：食窦魏氏菌Weisella cibaria、巴氏醋酸杆菌Acetobacter pasteurianus最适培养pH分别为6.5与6.0。本研究显示嗜水气单胞菌GZ1株的最适生长pH为6.5的弱酸性环境，可能是产酸菌最适酸性环境中生长，与自身产酸存在一定关系。NaCl的浓度通过渗透压来影响细菌的生长繁殖。本研究发现，该菌的最适生长繁殖NaCl浓度为2%，NaCl浓度为0%和5%时，细菌几乎不生长，可能是培养基中的渗透压比菌体内渗透压过低或过高所致。
细菌的生长繁殖需要碳源、氮源、无机盐、水和生长因子。在LB液体培养基中，酵母粉是细菌的主要碳源，为细菌提供能量；胰蛋白胨是主要氮源，为细菌提供合成蛋白质与核酸的原料。不同碳源、氮源的结构不同，被细菌的利用程度与代谢方式也不一样。本次研究中，蔗糖作为嗜水气单胞菌唯一碳源时，细菌浓度最高，为该菌培养条件的优化提供参考。蛋白胨为嗜水气单胞菌唯一氮源时，细菌浓度最高，蛋白胨促进嗜水气单胞菌的生长繁殖；但氯化氨、硫酸氨和尿素为氮源时，细菌几乎不生长即细菌含量较低，这可能是这三种氮源抑制了嗜水气单胞菌的生长，其抑制机制需进一步研究。
本试验采用正交设计与单因素方法相结合，筛选出不同培养条件对嗜水气单胞菌GZ1株生长状况的最优组合，使试验结果更科学、更完善。
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