一 方案概述
本方案为芬兰Bioscreen C Pro搭配原厂厌氧气体控制模块整机联用标准化完整实施方案，适用于严格厌氧菌、兼性厌氧菌、微氧微生物高通量生长动力学监测。气体模块负责仪器孵育腔体内部空气置换、持续低流量供气，配合原装蜂窝板、密闭舱体构建稳定无氧环境；整套系统可同步实现恒温、程序化振荡、时序OD浊度扫描与厌氧气氛维持，最长支持1600小时无人值守连续厌氧培养。
整套实施分为硬件安装检查、气体管路配置、样品厌氧前处理、上机程序设置、正式运行、实验结束停机、日常维护七大模块，区分严格厌氧、微需氧两种工况，明确安全规范与常见故障处置。
二 硬件组成与前期装配检查
1. 整套硬件清单
核心设备为Bioscreen C Pro主机、原厂选配厌氧气体控制模块，配套减压阀、精密流量计、PTFE耐腐气管、气体过滤器、单向止回阀。气源根据实验需求配置，严格厌氧推荐预混厌氧气体（氮气、二氧化碳、氢气混合气），微氧实验可选用氮气与二氧化碳混合气体。耗材包含原装100孔蜂窝培养板、厌氧配制培养基、透气/密闭封板膜。
2. 硬件装配检查步骤
确认厌氧气体模块通讯线缆稳定连接至Bioscreen主机背部通讯接口，插头完全卡紧。检查模块进气口、出气口密封圈无老化、开裂，所有管路接头拧紧，不存在漏气隐患。单向止回阀按照气流方向安装，防止腔体内部培养液、水汽回流进入气体模块造成内部元件腐蚀。
接通气体模块电源，开启主机，在软件界面确认气体模块识别正常，无硬件通讯报错。
三 管路连接与气密性测试
1. 管路连接顺序
高压气瓶出口→一级减压阀→精密流量计→气体过滤器→单向止回阀→厌氧气体控制模块进气口；厌氧模块出气口连接放空管路，排放气体通向室外或者通风橱内，禁止密闭汇集。
2. 气密性测试流程
关闭舱门并锁定加热盖板，气瓶输出压力调整至0.1–0.15 MPa。启动软件置换程序，通入实验所用混合气体，持续吹扫15分钟。完成吹扫后暂时关闭进气阀门，保持腔体密闭静置30分钟。
监测软件内部氧浓度读数，30分钟内氧含量上升幅度不超过0.2%视为气密性合格。若氧浓度快速上升，依次检查管路接头、舱门密封条、蜂窝板盖板密封位置，排查泄漏点位。
四 样品厌氧前处理与加样规范
1. 培养基预处理
严格厌氧实验所用培养基提前放置厌氧工作站完成预除氧，平衡至少12小时，消除培养基内溶解氧。避免培养基含有易氧化成分接触空气时间过长。
2. 菌液与加样操作
菌悬液配制全程在厌氧操作台内完成。使用原装蜂窝板，每孔添加培养液体积控制在200–250 μL，预留振荡安全空间，防止振荡过程液体飞溅。
全部加样结束后，根据菌株需求选择密封方案。严格厌氧菌实验使用气密性封板膜封闭板口；兼性厌氧、微氧实验可选用透气膜维持气体交换。将蜂窝板平稳放入仪器托盘，闭合原厂加热盖板，锁紧舱门。
五 仪器软件参数设置（完整上机程序）
1. 基础培养参数设置
设置目标培养温度，开启间歇振荡程序，设置振荡时长、静置间隔，保证菌体均匀悬浮。设定OD扫描通道、扫描时间间隔，建立动力学监测方案。
2. 厌氧气体程序设置
首先设置腔体吹扫阶段，吹扫流量参考原厂标准，吹扫时长根据气密性结果设置15–30分钟，置换腔体内部空气。
吹扫完成切换至维持供气模式，采用小流量持续流通或者间歇脉冲供气，避免大流量气流造成腔体温度剧烈波动。软件开启氧浓度实时监测功能，设定氧含量预警阈值。
3. 参数核对
确认气体程序、振荡程序、光学扫描程序同步生效，保存完整实验方案，所有参数留存记录便于实验复现。
六 正式实验运行期间管控要点
实验运行过程中禁止随意开启舱门，开门会直接导致外界空气大量进入腔体，破坏厌氧环境，整板数据失效。
定时观察软件氧浓度实时曲线，一旦氧浓度持续超标，第一时间检查气瓶余量、管路泄漏情况。
长时间连续厌氧培养条件下，定期查看气瓶剩余气量，提前准备备用气源，防止气源中断造成实验失败。
关注仪器温度曲线，气体持续通入会带走腔体热量，出现温度波动时适当调整参数，保证温度稳定。
七 实验结束标准化停机流程
1. 实验程序自动结束后，先关闭气体持续供气程序。
2. 缓慢打开舱门，保持通风橱环境，静置一段时间排出腔体内部残余可燃气体，涉及含氢气厌氧混合气时，该步骤不可省略，规避爆炸风险。
3. 取出蜂窝板，妥善进行灭菌处理，清理托盘内部可能存在的溅出培养液。
4. 关闭气瓶总阀，持续放空管路内残余压力，随后关闭厌氧气体模块与主机电源。
5. 擦拭腔体密封条、管路接头，去除水汽与培养基残留。
八 日常维护与故障处理
1. 常规维护要求
每次厌氧实验结束后检查舱门橡胶密封条，使用纯水擦拭，防止盐分、有机物堆积导致密封失效。气体前端过滤器按照使用频次定期更换，防止杂质进入气体控制模块。每半年完整开展一次气密性复测，年度光路校准同步进行气体模块功能检测。
2. 常见故障处置
软件无法识别气体模块，检查通讯线路重新插拔重启设备。腔体氧浓度居高不下，依次排查管路泄漏、舱门密封老化、封板膜密封性不足。温度持续不稳定，适当降低气体持续流量，延长温度平衡时间。
九 安全操作重要规范
使用含有氢气的厌氧混合气时，整套操作全程在通风橱区域进行，严禁火源，避免静电火花。气体管路禁止弯折挤压，高压减压阀由专业人员调试，禁止私自改动压力参数。长期无人值守实验，需要配备气体泄漏报警装置。