一、前期准备工作
1 酵母文库菌株预处理
获取酵母全基因组敲除/过表达/突变文库，先进行文库菌株复壮传代，完成基因型复核，确认菌株正确性，避免交叉污染。采用两轮同步预培养，消除长期冻存带来的生长差异，保证所有菌株生理状态一致。最后用统一基础培养基稀释菌液，调节初始OD至0.02~0.05，保证处于仪器线性检测区间；全程设置野生型亲本菌株、已知对照突变株以及纯培养基空白对照。准备足够生物学重复与技术重复，降低随机误差。
2 培养基配制与预处理
统一配制酵母基础培养基（如YPD或合成完全/缺陷培养基），按需添加筛选胁迫条件（药物、营养限制、氧化/渗透压/酸碱应激），整批次高压灭菌，调节pH并保持批次一致性。确认培养基无杂菌污染、无沉淀杂质，避免干扰浊度读数。
3 耗材与仪器预检
采用芬兰Bioscreen配套专用200孔蜂窝板，检查板底透光面完好无划痕、污渍；准备原厂适配防蒸发盖板/半透气封板。
清洁仪器孵育腔体与光路，完成基线校准，检查温控均匀性、振荡模块、串口通讯是否正常，排查板位温差和冷凝积水问题，确认仪器整体运行稳定。
二、200孔板布局与加样流程
1 板布局设计
采用棋盘式布局，降低局部温差、边缘蒸发效应带来的板效应误差。边缘孔可设置缓冲对照孔，减少边缘漂移干扰。
文库孔：均匀排布酵母全基因组文库菌株，按板位编号做好菌株信息映射并保存布局模板。
对照孔：分散放置野生型对照、阳性/阴性对照菌株、纯培养基空白对照，避免对照集中在单侧区域。完整记录板布局信息，确保后续数据可精准匹配菌株信息。
2 标准化加样
使用多通道移液枪统一加样，固定每孔终体积，保证各孔液面高度一致，减少蒸发差异；避免加样产生气泡、渗漏，防止干扰OD读数。加样完成后检查孔内状态，去除表面气泡。
3 封板处理
加盖原厂适配盖板或半透气封板，兼顾酵母正常气体交换和防蒸发、防冷凝水滴落需求；确认封板状态良好，避免长时间培养出现不均匀蒸发和冷凝污染。
三、上机参数设置与连续监测
1 板体放置
将200孔蜂窝板平稳卡入卡槽，确认卡紧到位，关闭舱门并确认舱门传感器正常工作，避免触发舱门异常中断扫描。确认电脑软件串口通讯正常，锁定正确COM端口，关闭电脑自动休眠、USB省电模式，接入UPS不间断电源防止断电。
2 仪器参数设置
孵育温度设置为酵母适宜温度（常规30℃），选用低速间歇振荡模式，减少酵母沉降结块同时避免产生大量气泡；检测波长设置为600nm；读数间隔选择20–30分钟；总培养时长根据酵母生长速率设定3–7天；开启连续自动扫描模式，全程禁止中途开盖操作。保存参数模板便于后续重复筛选。
3 运行监测
启动扫描程序，确认初始基线读数平稳无异常漂移；全程监测通讯状态和基线状态，保证时序数据连续完整，直至预设培养周期结束。
四、高通量数据预处理与筛选分析
1 原始数据导出与校正
导出全板时序OD数据为CSV格式，做好原始数据备份。使用空白对照孔时序数据逐点做基线扣零校正，去除培养基底色和基线漂移；使用适度移动平均滤波平滑噪声，剔除污染孔、严重沉降孔、异常漂移离群孔。
2 批量生长参数拟合
利用R语言、Python或Origin批量拟合每条曲线动力学参数：延滞期λ、比生长速率μ、最大OD、AUC曲线下总面积，计算相对生长得分和生长缺陷指数，与野生对照进行比对。设置筛选阈值，初步筛选生长缺陷、药物敏感、抗性等候选突变菌株，标记潜在阳性孔位。
3 统计校正与初筛结果处理
做批次校正和板效应校正，消除板位、边缘效应干扰；进行统计学检验评估差异显著性，减少假阳性结果；导出候选菌株编号，建立初筛候选菌株列表。
五、复筛验证与菌株鉴定
1 独立复筛
对初筛候选菌株进行独立重复Bioscreen生长曲线实验和固体平板验证，确认表型可重复，排除沉降、蒸发、板位误差导致的假阳性结果。
2 基因型验证
对确认阳性突变株进行PCR、测序验证基因型，确认突变位点正确，验证全基因组筛选结果真实性；保存验证菌株并记录完整表型数据。
六、仪器收尾与长期维护
1 板体与腔体清洁
取出200孔板并妥善处理废弃菌液，清洁孵育腔体，敞开舱门充分通风干燥，清除残留培养基、积水，防止霉菌滋生和持续结露。
2 仪器校准与归档
完成光路基线校准，恢复仪器默认参数；归档原始时序数据、板布局文件、分析脚本，建立筛选数据库保证结果可追溯可重复；定期执行仪器温控校准和腔体维护，保障后续高通量筛选稳定性。