一、培养基配制与预处理
1. 配方称量与溶解
按照实验需求称取培养基干粉、碳氮源、缓冲盐，加入去离子水搅拌加热充分溶解，按需调节pH值至实验标准区间。若实验需要添加药物、应激试剂，待基础培养基冷却至50℃以下再加入混匀，避免高温破坏活性物质。
2. 灭菌分装
配制完成后分装至灭菌容器，121℃高压蒸汽灭菌20分钟；灭菌后平稳放置冷却，避免剧烈摇晃产生大量气泡。全程设置单独空白对照培养基批次，仅含基础营养无菌种，用于后续基线校正。
3. 静置除泡与温度平衡
冷却后的培养基室温静置30分钟去除气泡，使用前放置恒温台平衡至实验设定孵育温度，减少上机后温差带来的结露与读数波动。
二、菌种活化、接种与200孔板加样
1. 菌株同步预培养
挑取目标菌株单菌落接种至对应液体培养基，过夜活化；次日转接传代一次，消除冻存菌株生长滞后差异。离心收集菌体，用新鲜培养基洗涤1至2次，重悬后测定浊度，稀释至标准初始OD值，细菌控制0.05~0.1，酵母/真菌控制0.02~0.05，保证所有组别初始菌浓度统一。
2. 微孔板标准化加样
使用原厂Bioscreen蜂窝板，每孔统一加入200μL至350μL体系，先加培养基，后加入菌悬液，轻柔吹打混匀。按实验布局均匀排布实验组、对照组、空白孔，边缘位置增设缓冲对照孔降低蒸发漂移；加样完成后目视检查，清除孔内气泡，杜绝渗漏。
3. 封板预处理
加盖原厂配套防蒸发盖板，长期动力学实验可搭配半透气封板膜密封板四周，减少舱内水汽进入形成冷凝水滴落；擦拭干净板底透光面，去除水渍、指纹、残留菌液，防止光路读数异常。
三、仪器检查与上机硬件操作
1. 仪器腔体预检
提前打开仪器预热30分钟，检查孵育舱内壁无积水、无霉斑，擦拭清洁光路窗口；确认温控模块、振荡电机、舱门传感器运行正常，清理托盘残留污渍。
2. 放置微孔板
平稳将蜂窝板嵌入仪器卡槽，卡紧固定，缓慢关闭舱门，确认舱门完全闭合无缝隙，避免运行中途触发开门保护程序中断扫描。
3. 电脑通讯连接
打开配套软件，查看设备管理器确认COM串口无异常占用，以管理员身份运行软件，匹配对应串口参数建立仪器与电脑通讯；关闭电脑自动休眠、USB省电设置，连接UPS不间断电源防止断电断连。
四、软件参数完整设置
1. 新建实验工程
创建新实验文件，设置工程名称，保存至不含中文、特殊符号的磁盘路径；录入微孔板布局信息，标注各组菌株、处理条件、重复编号，保存布局模板便于数据匹配。
2. 培养环境参数设定
设置孵育温度、间歇振荡频率与振幅，根据菌株生长速度选定读数间隔，快速细菌选用10min，常规微生物选用20min，慢生长真菌/酵母选用30min；输入总培养时长，检测波长统一设置600nm。
3. 基线与数据导出设置
开启初始基线扫描功能，选择空白对照孔作为校正基准；设置数据自动存储格式为CSV，勾选全程时序数据记录功能；关闭软件自动弹窗休眠，确认无拦截弹窗干扰连续监测。
4. 启动扫描程序
参数全部核对无误后执行预扫描，确认初始基线数值平稳无大幅跳动，正式启动连续监测，实验全程禁止中途开盖、修改参数、断开通讯线缆。
五、实验结束、数据导出与仪器收尾维护
1. 终止实验与数据导出
到达预设培养时长后停止扫描，软件内导出完整时序OD原始数据，备份原始工程文件，避免数据丢失。
2. 微孔板取出处理
打开舱门取出蜂窝板，按生物安全规范处理废弃菌液，清洗微孔板或做灭菌丢弃处理。
3. 仪器清洁保养
擦拭孵育舱内壁、顶盖、托盘残留水汽，敞开舱门通风干燥；执行仪器基线校准，恢复软件默认参数，关闭仪器与电脑电源，完成完整实验流程。