2结果与讨论
2.1发酵液中赤藓糖醇和葡萄糖定性分析结果
2.1.1薄层层析分析(图1)
1.甘油标准品2.混合标准品，自上而下为赤藓糖醇、葡萄糖3～6.CF4发酵液7.UV3-CF4-5 8.UV4-CF4-3 9.混合标准品，自上而下分别为甘油、赤藓糖醇10.UV3-CF4-1 11.UV3-CF4-3
对发酵液进行薄层层析分析，薄层板上出现了白色斑点。由图1可知，菌株CF4只产生甘油，经紫外诱变后，有赤藓糖醇产生。
2.1.2标准品与菌株CF4诱变前后发酵液的高效液相色谱图(图2、图3)
图2甘油标准品(A)和菌株CF4诱变前发酵液(B)的高效液相色谱图
图3赤藓糖醇标准品(C)和诱变菌株UV3-CF4-5发酵液(D)的高效液相色谱图
由图2可知，甘油的保留时间为7.10 min左右，菌株CF4诱变前只产甘油，与薄层层析结果一致。
由图3可知，赤藓糖醇保留时间为8.77 min左右，紫外诱变菌株UV3-CF4-5只产赤藓糖醇，与薄层层析结果一致。
2.2菌株CF4的生长曲线(图4)
图4菌株CF4的生长曲线
由图4可以看出，培养2～8 h期间菌体数量变化不明显，为延滞期；10 h后菌体数量迅速增加，进入生长期；20 h后菌体数量趋于稳定，即进入稳定期，可见该菌株的对数生长期在10～20 h之间。因此，选取培养时间为16 h的菌株进行紫外诱变。
2.3标准曲线
以赤藓糖醇浓度(g·L-1)为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，见图5。拟合得回归方程y=75791x+18334，R2=0.999，赤藓糖醇浓度范围为0.5～10 g·L-1时，线性相关较好。
图5赤藓糖醇浓度与峰面积的关系曲线
2.4紫外诱变时间的确定(图6)
图6紫外诱变时间对致死率的影响
由图6可知，紫外诱变270 s时，致死率达85%以上，因此，确定紫外诱变时间为270 s。
2.5菌株紫外诱变结果
菌株CF4经过紫外诱变处理，在平皿上长出较大、厚实的单菌落共36株，其中获得了6株产赤藓糖醇菌株，命名为UV4-CF4-3、UV3-CF4-1、UV3-CF4-5、UV3-CF4-4、UV3-CF4-3、UV3-CF4-6，挑取接种到斜面上，再分别接种到发酵培养基中，培养5 d，测定赤藓糖醇的产量，结果见表1。
表1菌株CF4紫外诱变结果
由表1可以看出，菌株UV3-CF4-5赤藓糖醇产量最高，为25.68 g·L-1，因而选择UV3-CF4-5作为优势菌株进行后续实验。
2.6菌株稳定性实验
将UV3-CF4-5进行传代培养，测定赤藓糖醇的产量，结果见表2。
表2 UV3-CF4-5的遗传稳定性
由表2可知，UV3-CF4-5经过5次传代，赤藓糖醇产量比较稳定，说明该菌株产赤藓糖醇有较好的稳定性。
3讨论
目前，赤藓糖醇产生菌主要是通过耐高渗法从自然界分离，而自然界筛选出的耐高渗菌株大多数产甘油，单产赤藓糖醇菌株较少并很难达到工业化生产的要求，这样极大地限制了高产赤藓糖醇菌株的分离。
在酵母菌代谢过程中，葡萄糖通过糖酵解和磷酸戊糖途径产生大量的还原能，从而导致多种多元醇的生成。赤藓糖醇主要是通过磷酸戊糖途径合成的，葡萄糖通过磷酸戊糖途径在4-磷酸赤藓糖脱氢酶作用下生成4-磷酸赤藓糖，4-磷酸赤藓糖在赤藓糖-4-磷酸激酶作用下生成赤藓糖，然后在赤藓糖还原酶作用下生成赤藓糖醇。甘油是在糖酵解过程中产生的，葡萄糖通过糖酵解，在一系列酶的作用下生成3-磷酸甘油醛，3-磷酸甘油醛氧化生成3-磷酸甘油酸的过程中产生甘油。本实验对甘油产生菌进行紫外诱变，可能阻断了糖酵解的过程，而使葡萄糖降解主要通过磷酸戊糖途径进行，生成赤藓糖醇，具体阻断机制需要进一步研究证明。
4结论
(1)通过对产甘油菌株CF4进行紫外诱变处理，获得了6株产赤藓糖醇的菌株，其中菌株UV3-CF4-5产量最高，为25.68 g·L-1，效果比较显著，为产赤藓糖醇菌株的筛选提供了一条新的途径。
(2)研究了菌株UV3-CF4-5的遗传稳定性，结果表明，经过多次传代，菌株UV3-CF4-5产赤藓糖醇的能力没有改变，表明其是稳定的变异株。
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