1.3.2氨氮降解菌的分离纯化
配制好分离平板培养基，灭菌、分装、冷却后，取第2次富集培养基中的上清菌液1 mL，在无菌操作条件下将培养液稀释、涂布于分离平板培养基上，于28℃恒温培养箱培养2～3天，至平板长出单菌落为止；挑取各个单菌落至新的平板上划线，28℃下培养2～3天，至平板上长出单菌落为止，以进一步纯化；挑选各个单菌落于斜面培养基上，于28℃下培养24 h；待斜面长出菌苔后，分别以斜面固态保藏于4℃冰箱和中制成甘油管保藏于-20℃冰箱中。
1.3.3制备菌悬液及测定细胞浓度
将活化后的各菌种接入摇瓶种子培养基；各接入1环，于150 r/min、28℃恒温摇床培养24 h；在4℃、10000 r/min下离心15 min并弃上清液，收集菌体；将湿菌体加至无菌的生理盐水中洗涤3～4次，测定OD600=1，并将其配制成细胞浓度约为109个/mL的菌悬液备用。
1.3.4筛选高效降解菌
制备摇瓶筛选培养基190 mL加入1000 mL的三角瓶中，灭菌、冷却后，分别接入各菌株的细胞浓度相等的菌悬液；置于150 r/min、28℃恒温摇床中培养72 h；采用《水杨酸分光光度法》分析经各菌种降解后的培养基中的氨氮残留量(24，48，72 h各测1次)；用未接种的摇瓶做参照，记录数据并计算氨氮降解率，并按式(1)计算菌株的氨氮降解率：
综合数据，根据降解率的大小，优选出降解效率最高的目的菌株。
1.3.5高效降解菌菌株最大吸收波长的测定
配制好100 mL活化培养基，灭菌、冷却后，将优选出的菌株在活化培养基中活化24 h(将斜面保藏的菌种接1环到活化培养基中，置于28℃和150 r/min条件下培养24 h)，取培养液用紫外-可见光分光光度仪在340～600 nm的波长下以未接种的培养基为参比测定其OD值，以波长为横坐标，以OD值为纵坐标画图，确定该优选菌株的最大吸收波长。
1.3.6高效降解菌菌株的生长曲线测定
将活化好的优选菌株，接1环至新鲜的活化培养基，在28℃、150 r/min恒温振荡培养，在该优选菌株的最大吸收波长处，每隔2 h取一定量培养液测定其OD值，以培养时间为横坐标，以最大吸收波长处的OD值为纵坐标绘制生长曲线。
1.3.7氨氮降解菌菌株的初步鉴定
对优选菌种进行平板培养、革兰氏染色，观察其菌落形态及革兰氏属性。同时，参照《伯杰氏细菌鉴定手册》的方法，对生理生化特征等方面进行初步鉴定，如葡萄糖发酵试验、需氧性试验等。
1.3.8菌株的16S rDNA测序
氨氮降解菌菌株的16S rDNA PCR扩增引物采用通用引物：正向引物27F为5′-AGAGTTTGATCC-TGGCTCA-3′，反向引物1492R为5′-GGTTACCTTG-TTACGACTT-3′(由上海生物工程有限公司合成)，扩增产物电泳检测后送上海生物工程有限公司测序，将测得序列通过NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)网站的GenBank核酸序列数据库内进行BLAST比对，找出核酸数据库中与氨氮降解菌菌株同源性较高的菌株序列，下载这些菌株的DNA序列，然后用生物软件MEGA4进行CLUSTAL比对并构建氨氮降解菌菌株的系统发育树。
2实验结果
2.1分离筛选高效氨氮降解菌的结果
富集实验的情况如下：第1天富集后pH为6.10；第2天为4.5，说明富集的菌株是产酸的；分离纯化试验：从泡菜原材料中共筛选了25株能降解高浓度氨氮的菌株；最后对这25株菌进行了氨氮降解率的测定实验。结果表明：在氨氮浓度为500 mg/L的液体培养基下，24 h内这些菌株氨氮降解率的范围为3.85%～29.81%；48 h的氨氮降解率范围为13.46%～43.64%，72 h的氨氮降解范围为35.72%～64.85%。由于硫酸铵在培养基灭菌过程中会出现高温分解，从而导致NH4-N的浓度降低，因此在培养基的配制过程中采用先不加硫酸铵灭菌后，通过过滤除菌将硫酸铵加入到培养基中后接种培养。试验表明：LJK8菌株的降解率最高为64.85%，因此对LJK8菌株做进一步的研究。
2.2 LJK8菌株最大吸收波长的测定
LJK8菌株吸收波长实验结果见图1。
图1 LJK8菌株吸收波长
由图1可知，在波长340～600 nm之间，LJK8菌株在380 nm处有最大吸收峰，由此在380 nm处测其生长曲线，以研究其生长量与氨氮降解率之间的关系。
2.3 LJK8菌株的生长曲线测定
LJK8菌株的生长曲线测定结果见图2。
图2 LJK8菌株的生长曲线
由图2可知，LJK8菌株在0～6 h为生长的适应期；在6～14 h为对数生长期；在14～36 h为生长的稳定期；在36 h之后才有所衰亡。LJK8菌株达到最大生长量是在培养第20 h。