真菌培养

真菌培养是临床上病原性真菌常用的非常重要的检查方法。


适用条件:

确定临床标本中病原真菌的种类,提高对病原体检出的阳性率,保存菌种,确定病原真菌的药物敏感性、筛选耐药菌株;一旦发现肯定的致病原,譬如红色毛癣菌或新生隐球菌时,即可确立诊断。


所用培养基的种类和意义:

1、基础分离培养基:只提供病原性真菌生长所需要的最基本成分譬如碳、氮、磷以及矿物质的培养基。

2、沙堡弱氏培养基(SDA):由Sabouraud于18世纪开发,起初用粗制蛋白胨作氮源,以麦芽糖或蜂蜜为碳源。大多数真菌生长尚可,随后用精制蛋白胨和葡萄糖代替原有成分。Emmons改良后使其碳水化合物为2%,pH升至6.8-7.0,加入放线菌酮和氯霉素以抑制腐生型真菌(多数可能为条件致病菌)和大多数细菌(并非所有细菌)。含这两种抗生素的SDA(pH6.8-7.0)已有商品供应。放线菌酮也抑制新生隐球菌、一些念珠菌、烟曲霉等,应该引起注意。含4%糖、低pH的SDA仍用于皮肤癣菌的形态学研究。

3、脑心浸膏琼脂(BHI):BHI也用于双相真菌皮炎芽生菌等从菌丝相向酵母相转变时,其中也可以加入抗生素和血液制品。

4、抑制性霉菌琼脂(IMA):氯霉素可抑制细菌的生长而不抑制真菌的生长,IMA用于临床标本最初的增菌培养,常用于筛选防线菌酮敏感的真菌,如隐球菌、组织胞浆菌和接合菌。

5、特殊培养基:包括(1)、咖啡酸琼脂(CAA),用于辨认新生隐球菌,因为新生隐球菌含有酚氧化酶,在CAA培养基中产生黑色素,使菌落呈黑色;此培养基有助于混合培养物中选择性地培养新生隐球菌;CAA培养基对光敏感,应加以避光保护。(2)、鸟食琼脂(BA),分离痰等污染严重的标本中新生隐球菌。(3)、KT培养基,含吐温、蛋白、烟酸和0.3%水解酪蛋白氨基酸,用于皮炎芽生菌转相(为酵母相)培养时使用。(4)、CHROMagar念珠菌显色培养基,将培养后的单菌落在CHROMagar念珠菌显色培养基划线接种,30-37°C培养48小时,观察颜色变化,根据不同颜色鉴定菌种。


真菌培养标本的要求:

在Ⅱ级生物安全柜中进行培养操作。血液标本应该注意合适的量,并多次培养,最好使用解离离心系统处理标本;脑脊液培养阳性可确诊,但阳性率低;怀疑呼吸系统真菌感染时,使用深咳出的痰,必要时可进行纤维支气管镜防污染毛刷取痰、支气管肺泡灌洗液、胸腔积液、活检组织;怀疑泌尿系统感染时,采集清晨清洁的中段尿,最好采集自留置导尿管,尽快接种;皮肤、甲和毛发应收集到折好的黑纸中,尽快接种。


培养条件:

建议使用室温或30°C培养7天,在这种温度下几乎所有病原性真菌生长较快较好。在某些情况下,做高温辅助培养有助于鉴定,譬如烟曲霉在45°C培养时可用来区别其它曲霉。双相真菌在37°C或组织中可以以酵母或小球体形式生长,常用于区别其它真菌。对于组织、脑脊液等标本,或怀疑罕见真菌或慢生长真菌(如荚膜组织胞浆菌、隐球菌)感染时,建议至少培养1个月;培养箱应有湿度控制。


真菌培养结果的意义:

无菌部位(譬如血液、脑脊液)的标本,真菌培养阳性,即可确定诊断。非无菌标本,两个试管有单一形态真菌生长,真菌镜检同时阳性者提示有临床意义;应当结合真菌生长部位、是否连续培养阳性、真菌镜检提示、组织病理学结果、最高生长温度及患者的临床信息,以区分致病菌和污染菌。

相关新闻推荐

1、观察细菌生长变化,判断孵育孔内药物杀菌或抑菌效果

2、三种HMO对益生菌和病原菌生长的影响

3、李斯特菌ST87在25°C不同营养条件下牛肉和蔬菜汁中的生长曲线

4、微生物检测基础知识

5、甘肃陇南油橄榄叶提取物对几种常见细菌生长曲线的影响