WS 4560^T^（FR850019）和WS 4615（FR850020）的完整16S rRNA基因序列（1399 bp）以及prs、recA、sigB和HSP60基因的部分串联序列（1646 bp）相同，相对于其他已知李斯特菌属物种显示出独特的谱系。WS 4560^T^与洛氏李斯特菌DSM 22097^T^和格氏李斯特菌DSM 20601^T^（其最近的邻种）的16S rRNA相似性值分别为99.0%和95.0%（图1）。串联基因序列分析显示与洛氏李斯特菌DSM 22097^T^的相似性为81.0%，与格氏李斯特菌DSM 20601^T^的相似性为79.0%，进一步证实了新型分离株与李斯特菌属其他成员的明确分离（图2）。
图1. 基于16S rRNA序列比较构建的核苷酸序列相似性树，显示WS 4560^T^与李斯特菌属成员的关系。选择热杀索丝菌DSM 20171^T^作为外群。该树通过邻接法构建，基于1399个核苷酸的比较。引导值以500次重复的百分比表示，标于分支点。标尺，序列分歧度2%。当按照Kimura方法估计距离生成树时，可获得相同的树拓扑结构（数据未显示）。序列的GenBank登录号显示在括号中。
图2. 基于串联部分prs、recA、sigB和HSP60基因序列（1646 bp）比较构建的核苷酸序列相似性树。选择热杀索丝菌DSM 20171^T^作为外群。该树通过邻接法构建。引导值以500次重复的百分比表示，标于分支点。标尺，序列分歧度10%。当按照Kimura方法估计距离生成树时，可获得相同的树拓扑结构（数据未显示）。部分序列的登录号见表S3。
结果与讨论
基于迄今为止描述的李斯特菌属物种的表型特征和基因型距离，本研究中研究的两株分离株应被归类为李斯特菌属内的一个新种，建议命名为薇氏李斯特菌（Listeria weihenstephanensis sp. nov.）。薇氏李斯特菌的模式菌株为WS 4560^T^，WS 4615（来自同一地点）作为薇氏李斯特菌的第二个代表菌株。由于DNA-DNA杂交值高于95%，这两株分离株属于同一物种。在所研究的位点中未发现这两株分离株之间的序列差异，也未发现表型差异，但DNA G+C含量存在微小差异，不容忽视。由于RAPD图谱相同（数据未显示），且菌株来自同一采样点，我们不能排除它们属于同一克隆的推测。薇氏李斯特菌、洛氏李斯特菌DSM 22097^T^和单核细胞增生李斯特菌DSM 20600^T^的鉴别特征列于表1。
表1. WS 4560^T^、WS 4615、洛氏李斯特菌DSM 22097^T^和单核细胞增生李斯特菌DSM 20600^T^的鉴别特征
| 特征 | Carnobacterium alterfunditum LMG 23766T | Carnobacterium funditum LMG 22054T | Carnobacterium inhibens LMG 22185T | Carnobacterium maltaromaticum LMG 19076T |
| 细胞长度 (μm) | 3.2 | 3.2 | 2.8 | 1.9 |
| DNA G+C含量 (mol%) | 41.8 | 41.0 | 41.0 | 37-39* |
| 呼吸醌 | MK-7 (100%) | MK-7 (100%) | MK-7 (100%) | MK-7, MK-6, MK-5* |
| 硝酸盐还原 | + | + | + | − |
| BHI肉汤+6.5% NaCl中的倍增时间 | 22±1 h | 23 h | 2.75 h | 103±5 min |
| BHI肉汤+10.5% NaCl中的生长 | − | − | − | + |
| BHI肉汤38°C下的生长 | − | − | + | + |
| BHI肉汤40°C下的生长 | − | − | + | + |
| PC肉汤3°C下的生长 | + | + | − | − |
| 最适生长温度 (°C) | 28-34 | 28-34 | 28-34 | 32-36 |
| D-芳基酰胺酶 | − | − | + | + |
| α-甘露糖苷酶 | − | − | + | + |
| 产酸自： | ||||
| 1-磷酸葡萄糖 | − | − | − | + |
| D-核糖 | + | + | + | − |
| D-木糖 | + | + | + | − |
| D-半乳糖 | − | − | + | − |
| 肌醇 | + | + | + | − |
| D-甘露醇 | + | + | + | − |
| D-山梨醇 | − | − | − | + |
| 甲基α-D-甘露糖苷 | − | − | + | + |
| 蜜二糖 | − | − | + | + |
| 蔗糖 | − | − | (+) | + |
| 棉子糖 | − | − | + | − |
| 糖原 | + | + | + | − |
| 松三糖 | − | − | (+) | + |
| D-阿拉伯糖醇 | + | + | − | + |
| *数据引自《伯杰氏系统细菌学手册》(Ludwig et al., 2009)。 | ||||
薇氏李斯特菌新种描述
薇氏李斯特菌（Listeria weihenstephanensis，wei.hen.ste.phan.en'sis，新拉丁语阴性形容词，weihenstephanensis，指德国南部的弗赖辛/魏恩施蒂芬，模式菌株在此鉴定）。
细胞为规则杆状，直径0.4-0.5 μm，长2.0-4.5 μm，末端圆钝。不形成芽孢和荚膜。在TSA上的菌落直径为1.0-2.5 mm，半透明、圆形、光滑、白色、低凸起，边缘略不规则。两株分离株的最适生长温度为28-34°C。两株分离株在PC肉汤中3°C培养10天内可生长。在38°C下未观察到生长。在15-30°C培养时细胞轻微运动。最适生长pH为7-8。在厌氧条件下可生长。菌落在TSA上通过斜透射光观察时呈现蓝色虹彩。在含高达6.5%（w/v）NaCl的营养肉汤中可生长。过氧化氢酶和甲基红试验阳性，氧化酶、吲哚、Voges-Proskauer、外源性柠檬酸盐利用、H~2~S和脲酶水解阴性。硝酸盐还原为亚硝酸盐阳性。非溶血性，CAMP试验阴性。肽聚糖的诊断性二氨基氨基酸为内消旋二氨基庚二酸（A1c型）。唯一呼吸醌为甲萘醌MK-7。主要脂肪酸为anteiso-C~15:0~和anteiso-C~17:0~。
使用API Listeria试纸条（30°C有氧培养24小时）进行生化测试，芳基酰胺酶、α-甘露糖苷酶、D-核糖酸化、葡萄糖-1-磷酸和D-塔格糖为阴性；七叶苷水解、D-阿拉伯糖醇、D-木糖、L-鼠李糖和甲基α-D-吡喃葡萄糖苷酸化为阳性。
根据API 50CH试验系统结果，厌氧培养14天后，以下物质产酸：甘油、D-核糖、D-木糖、D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、L-鼠李糖、肌醇、D-甘露醇、甲基α-D-吡喃葡萄糖苷、N-乙酰葡萄糖胺、苦杏仁苷、熊果苷、七叶苷、水杨苷、纤维二糖、麦芽糖、乳糖、海藻糖、淀粉、糖原、木糖醇、龙胆二糖、D-阿拉伯糖醇和5-酮基葡萄糖酸钾。以下物质不产酸：赤藓糖醇、D-阿拉伯糖、L-阿拉伯糖、D-半乳糖、L-木糖、D-阿东糖醇、L-山梨糖、甲基β-D-吡喃木糖苷、卫矛醇、D-山梨醇、甲基α-D-吡喃甘露糖苷、蜜二糖、蔗糖、菊粉、松三糖、棉子糖、松三糖、D-来苏糖、D-塔格糖、D-岩藻糖、L-岩藻糖、L-阿拉伯糖醇、葡萄糖酸钾或2-酮基葡萄糖酸钾。
模式菌株为WS 4560^T^（=DSM 24698^T^=LMG 26374^T^），从普费芬霍芬沃尔恩扎赫的Postweiher池塘中的三棱叶中分离得到。菌株WS 4615（=DSM 24699=LMG 26375）从同一地点分离得到，是该种的第二个菌株。WS 4560^T^和WS 4615的DNA G+C含量分别为41.8和41.0 mol%。
补充材料
菌株WS 4560^T^和WS 4615的16S rRNA基因序列的GenBank/EMBL/DDBJ登录号分别为FR850019和FR850020。
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