2.3不同培养基对DH 066和F 107菌丝生长的影响
不同培养基对DH 066和F 107生长速度的影响分别见图4和图5。从图4可知,DH 066在相同的培养温度(25℃)下,其生长速度快慢依次排列为10 g/L WBWA≈10 g/L CMWA>10 g/L WBA>20 g/L DIA>10 g/L CMA>20 g/L DA。于10 g/L WBWA和10 g/L CMWA培养基中生长最佳,5 d就已长满整个平皿;20 g/L DA生长最差,10 d才能覆盖整个平皿。从图5可知,F 107在相同的培养温度(25℃)下,其生长速度快慢依次排列为10 g/L WBWA>10 g/L CMWA>10 g/L WBA>20 g/L DIA≈10 g/L CMA>20 g/L DA。于10 g/L WBWA培养基中生长最佳,6 d长满整个平皿;20 g/L DA生长最差,10 d还未覆盖整个平皿。往往菌丝在最后1 d生长速度减慢(斜率小),这是由于菌丝长满整个平皿所致。
图4捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌DH 066于6种不同培养基中的生长情况
图5捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌F 107于6种不同培养基中的生长情况
3讨论
本研究表明DH 066在20 g/L DA培养基中的分生孢子明显要比其他培养基中的大,而F 107在10 g/L CMA中的分生孢子要比其他培养基的大,Singh R K等研究发现,在牛肉膏琼脂培养基中培养的A.oligospora,其分生孢子长度最长可达51.0μm,在营养琼脂培养基中最长可达40μm,而在Richard’s,YPSS,Sabouraud’s,PDA和CMA培养基中,分生孢子最长为30.50μm,在含有线虫的CMA培养基中产生的分生孢子要比不加线虫的CMA培养基中的大。Haaed K研究表明在含有线虫的培养基中的分生孢子比不加线虫的培养基中要小,这与Singh R K的研究结果相反,这种结果可能由于同种不同株导致的。这说明同一株少孢节丛孢菌在不同培养基中分生孢子大小不同,并且也说明同种不同株的分生孢子在同种培养基中分生孢子大小也不同。因此,鉴于在不同培养基中分生孢子的大小和形态有所差异,因此在鉴定种时,应统一在CMA培养基中测量孢子大小,并进行鉴定。
Cooke R C等描述A.oligospora分生孢子倒卵形,分生孢子1个分隔并在分隔处溢缩,分生孢子梗不分枝。Haaed K研究表明,A.oligospora在CMA培养基中产生的分生孢子倒卵形至梨形,分生孢子1个分隔,末端细胞是顶端细胞的2倍,分生孢子梗不分枝,以及国内对该种不同分离株也有不少描述,但没有报道过该种偶尔产生2个分隔的分生孢子以及分生孢子梗偶尔分枝的现象。
在10 g/L WBWA和10 g/L CMWA培养基中,DH 066和F 107菌丝生长速度最快,在10 g/L WBA培养基两株菌的生长速度略比10 g/L WBWA和10 g/L CMWA慢,但要远远快于10 g/L CMA。这表明WBA培养基要比CMA培养基更适合培养A.oligospora,也表明自来水比蒸馏水更适合培养该菌。但并不是营养越高菌丝生长速度越快,我们研究资料表明,在20 g/L CMA以及PDA培养基中,菌丝生长速度较慢,明显要比4 g/L和10 g/L CMA慢,这与杨晓野等的试验结论一致。在相同培养基中DH 066生长速度明显要比F 107快,这说明不同分离株的确存在差异。
在10 g/L WBA培养基中所产生的分生孢子的量比在10 g/L CMA及20 g/L DIA明显要多,这说明麸皮培养基不仅适合于A.oligospora的生长,也适合于大量生产分生孢子。麸皮价格相比玉米和其他粮食更低,从实用性的角度来说,更适合于今后的大规模生产。
早在20世纪20年代,Nathan Cobb就提出用线虫的天敌来防治线虫,直到1978年Coyrol J C等才成功地用强力节丛孢(A.robusta,商品名:Royale 300)防治蘑菇生产上线虫的危害;于1983年,Coyrol J C将A.irregularis(商品名:Royale 350)用于番茄生产中对根结线虫的防治。目前,国内也有用于植物线虫的产品,如淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus,商品名:灭线宁),厚孢轮枝菌(Pochoniachlamydosporia,商品名:线虫必克)。但用于家畜寄生线虫的生防治剂还没有商品化,因为用于动物寄生线虫防治的菌种需添加到家畜饲料中让其采食,这样既节约成本,又方便实施。因此,要求菌种必须能够通过家畜的消化道,与植物生防菌种相比,对菌种要求更高。由于本次研究的2株A.oligospora来源于粪堆和新鲜粪便,已通过家畜的消化道,说明其可能对家畜胃肠道的pH、酶等具有一定的耐受性,但还需进一步进行体内试验以验证其通过家畜胃肠道的生存活力。
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