2结果与讨论
2.1产絮菌的生长发酵及其絮凝活性
微生物絮凝剂作为产絮菌的发酵代谢产物,其絮凝活性与产絮菌的生长情况有很强的关联性,观测产絮菌J-1在33 h内的生长变化情况,结果见图1。
图1产絮菌J-1的絮凝活性随其生长状态的变化
由图1可知,在0~12 h,产絮菌J-1处于对数生长期,理论上,其絮凝率k应随着菌体的快速生长而逐渐升高,但实际却在0~6 h内出现下降现象。这是由于絮凝剂液体培养基造成的误差[8]。空白培养基具有一定的絮凝效果,随着营养成分供菌体生长而消耗,絮凝率呈下降趋势。6 h后随着菌体生长接近最高值,开始不断分泌代谢产物,絮凝率开始上升。12~27 h内,产絮菌J-1处于稳定期,菌体量保持稳定状态,代谢产物大量积累,在15 h时,菌量积累到最大值为2.05 g/L,絮凝率达到94.97%。21 h后产絮菌J-1处于稳定期后期,培养基提供的营养不足以供给菌体生长,代谢产物的分泌呈减缓趋势。27 h后,部分代谢产物被用来弥补培养基营养成分的缺失,产絮菌J-1进入衰亡期,絮凝率继续下降。综上所述,絮凝率的变化趋势符合产絮菌J-1的生长代谢规律。
为进一步验证产絮菌J-1的絮凝活性与其生长代谢规律的关联性,对发酵15 h的产絮菌J-1传代培养10次,观测其菌浊与絮凝率的变化,见图2。
图2产絮菌J-1絮凝活性与菌浊的稳定性
由图2可知,传代次数n为10,产絮菌J-1的絮凝率均保持在95%左右,其菌浊也保持在最高水平。这不仅验证了产絮菌J-1的絮凝活性与其生长代谢规律的关联性,同时证明了产絮菌J-1遗传稳定性优良。
2.2产絮菌的生长动力学模型
为更加科学、客观地掌握产絮菌J-1生长变化的内在规律,观测其33 h内的菌量变化规律,选择Logistic方程建立产絮菌J-1的生长动力学模型。
对Logistic方程积分计算后,得到:
式中:ρ0——初始生物量,g/L,产絮菌J-1的ρ0为0.28 g/L;
ρm——最大生物量,g/L,产絮菌J-1的ρm为2.05 g/L;
K——最大比生长速率,h-1;
t——时间,h;
Y——菌体干重,g/L。
将ρ0和ρm值代入式(1):
产絮菌J-1的培养时间t为自变量,菌体干重Y为因变量,进行非线性拟合,结果见图3。
由图3可知,Logistic方程基本可以反映产絮菌J-1的生长变化规律。衰亡期菌量的预测值低于实验值,这是由于实验中菌量的测定采取了菌体干重法,既有活菌又有死菌,而Logistic方程对菌量的预测值为活菌量。两者平均残差为0.008,拟合度R2为0.98。利用该拟合曲线,求得K值为0.441,代入式(2),获得产絮菌J-1的生长动力学模型:
图3生长动力学拟合曲线
产絮菌J-1的比生长速率0.441,高于实验室已有的高效产絮菌的比生长速率0.253,说明产絮菌J-1代时相对较短,为微生物絮凝剂的发酵节约了时间成本。
2.3产絮菌的产物生成动力学模型
图1表明,产絮菌J-1的絮凝活性由其代谢产物确定,且稳定期絮凝率最高,此时菌体生长也达到最高值,比生长速率减缓,菌体生长与产物形成属于部分偶联型,故选取Luedeking-Piret方程进行模拟。
对Luedeking-Piret方程积分计算后,得到:
式中:α——产物生成常数(关联菌体生长);
β——产物生成常数(关联菌体量);
P——产物生成量,g/L。
代入K值,有
产絮菌J-1的培养时间t为自变量,产物生成量P为因变量,进行非线性拟合,结果见图4。
由图4可知,Luedeking-Piret方程可以较好地反映产絮菌J-1的代谢规律。代谢产物的实验值与预测值的平均残差为0.016,拟合度R2为0.97。利用该拟合曲线,求得α值为1.29,β值为-0.010,代入式(5),得到产絮菌J-1的产物生成动力学模型:
当α≠0、β=0时,发酵类型属于生长偶联型;α=0、β≠0时,发酵类型属于非生长偶联型;α≠0、β≠0时,发酵类型属于部分生长偶联型。由式(6)可见,当α值越大,β值越小时,产物生成量越高。再次证明了产絮菌J-1发酵微生物絮凝剂的过程为部分偶联型。
综上所述,菌体生长与产物形成属于部分偶联型,所以产絮菌J-1代谢产物的生成与其菌体总量相关,而与菌体生长关联较小。因此,在微生物絮凝剂大量合成前,若比生长速率较大,保证充足的营养和生物量,菌体快速繁殖,菌体总量大量积累,产絮菌J-1代谢产物的合成速率可以得到有效提高。
3结论
(1)产絮菌J-1絮凝活性的变化趋势符合其生长代谢规律。当发酵时间为15 h时,即产絮菌J-1的稳定期,絮凝活性最高为94.97%,且连续传代10次,保持稳定。
(2)利用Logistic方程模拟产絮菌J-1的生长变化规律。实验中菌量测选值与Logistic方程预测值的平均残差为0.008,根据生长动力学拟合曲线,求得K值为0.441,获得产絮菌J-1生长动力学模型。
(3)利用Luedeking-Piret方程可以较好地反映产絮菌J-1的代谢规律。代谢产物实验值与预测值的平均残差为0.016,根据发酵动力学拟合曲线,获得产絮菌J-1的产物生成动力学模型。
相关新闻推荐
2、胰岛素对昆虫病原线虫及其共生细菌伯氏致病杆菌生长、寿命的影响(三)
3、不同浓度冠菌素对番茄防御基因表达、胼胝质沉积及野生型致病菌生长的影响(二)