探讨欧洲花楸悬浮细胞生长规律和动力学参数。方法:测定欧洲花楸悬浮细胞生物量及细胞悬浮液pH值变化;利用细胞鲜重和干重值对欧洲花楸悬浮细胞生长曲线进行拟合,用数学建模模拟欧洲花楸悬浮细胞增殖情况,并对拟合函数求一阶、二阶导数,求算欧洲花楸悬浮细胞生长速率及生长加速度。


细胞生长曲线建模方法


根据欧洲花楸悬浮细胞生长曲线,构建Logistic、Gompertz和Gauss模型,利用R2值确定最佳拟合模型,并利用matlab2010b软件,由筛选得到生长曲线函数中求得细胞最大增长速度及加速度参数,


细胞中次生代谢产物提取和检测方法


将收获的细胞用15 mL甲醇在研钵中研碎,过滤到鸡心瓶中,过滤后的细胞残渣再用10 mL甲醇提取一次,合并滤液,置于旋转蒸发仪上浓缩至干。培养基用15 mL乙酸乙酯萃取两次,用分液漏斗将乙酸乙酯层转移至鸡心瓶中,于旋转蒸发仪上浓缩至干,后用500μL的甲醇溶解,0.45μm滤膜过滤,用于HPLC检测。


HPLC测定条件为:4.6×150 mmC18(5μm)reverse column;流动相为水(0.1%甲酸):甲醇(50∶50)流速0.7 mL·min-1;全波长紫外检测。

欧洲花楸悬浮细胞干重增长曲线

结果:欧洲花楸悬浮细胞液的pH值随培养时间增加而越来越大,培养时间到16 d,pH>6,不再适宜细胞生长;Logistic模型能够描述欧洲花楸悬浮细胞生长曲线变化。培养第5d时细胞增长加速度达到最大,在8 d时生长速率达到最大,结论:欧洲花楸悬浮细胞生长函数符合logistic曲线,函数为f(x)=0.369 9/(1+10.77e-0.329 2x),细胞在14 d时进入增长平台期,在细胞生长至第5 d时可进行诱导子处理。


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